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近年来海水养殖业发展迅速,饲料原料资源紧缺、养殖成本过高、养殖环境恶化等问题日益突出,阻碍了海水养殖业的发展。因此,寻找新的可持续饲料原料势在必行。利用大型海藻为饲料原料,生产含有生物活性物质的饲料,不仅能降低传统饲料原料的消耗,还具有促进生产,提高养殖动物免疫力,改善养殖动物肌肉品质和脂肪沉积等多重功效。我国沿海地区红藻龙须菜(Gracilaria lemaneiformis)产量丰富,本文采用酶学、组织学、生理生化学和分子生物学等方法,以黄鳍鲷(Acanthopagrus latus)和黑鲷(Acanthopagrus schlegeli)为研究对象开展养殖试验,研究了龙须菜对两种鲷科鱼类生理生化的影响及其内源性机制,并探索了提高龙须菜饲料利用率的方法。具体结果如下: 1.龙须菜饲料对黄鳍鲷营养生理的影响 以不含龙须菜的基础饲料为对照组,以3%,5%,10%,15%龙须菜等氮替代豆粕配制四组实验饲料,同时在15%龙须菜饲料中添加1‰商业非淀粉多糖酶作为第五组实验饲料投喂黄鳍鲷7周后,实验结果表明摄食5%龙须菜饲料的黄鳍鲷饲料转化率、干物质表观消化率、肾脏溶菌酶活性、肝脏过氧化氢酶活性及前肠酸性磷酸酶和γ-谷氨酰转肽酶活性显著高于对照组,增重率也有一定程度的提高。摄食10%龙须菜饲料黄鳍鲷肝脏酸性磷酸酶活性和前肠总抗氧化力要显著高于对照组,血清低密度脂蛋白胆固醇含量显著低于对照组;摄食15%龙须菜饲料黄鳍鲷的成活率、脂肪表观消化率、血清总蛋白和低密度脂蛋白胆固醇含量、前肠Na+, K+-ATP酶及麦芽糖酶活性显著低于对照组,全鱼灰分含量、血清谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性显著高于对照组,增重率没有受到显著影响。在15%龙须菜饲料中加非淀粉多糖酶后,黄鳍鲷摄食率显著高于其它各组,存活率、肝脏超氧化物歧化酶活性、血清溶菌酶活性显著高于摄食15%龙须菜饲料的黄鳍鲷。 2.龙须菜对黑鲷营养生理的影响 以不含龙须菜的基础饲料为对照组,以5%,10%,15%,20%龙须菜等氮替代鱼粉配制四组实验饲料,同时在20%龙须菜饲料中添加2‰微生态制剂作为第五组实验饲料投喂黑鲷8周后,实验结果表明摄食20%龙须菜饲料的黑鲷其增重率、饲料转化率、肝体比、全鱼和肝脏脂肪含量、胃蛋白酶活性、前肠脂肪酶和淀粉酶活性、肝脏和肾脏的超氧化物歧化酶和酸性磷酸酶活性以及肝脏和前肠的碱性磷酸酶活性、肝脏谷胱甘肽过氧化物酶活性、血清溶菌酶活性、血清低密度脂蛋白胆固醇和总胆固醇都比对照组显著下降。摄食5%龙须菜饲料的黑鲷肝脏过氧化氢酶和肾脏谷胱甘肽过氧化物酶活性显著高于对照组,摄食10%龙须菜饲料的黑鲷肝脏过氧化氢酶活性和肌肉总抗氧化力显著高于对照组。摄食20%龙须菜饲料的黑鲷血清和肌肉的丙二醛含量及血清谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性都显著高于对照组。在20%的龙须菜饲料中添加商业微生态制剂后,显著提高了黑鲷增重率、前肠胰蛋白酶和淀粉酶活性,血清溶菌酶活性,肝脏酸性磷酸酶活性。 3.龙须菜对黑鲷脂肪代谢及肌肉品质的影响 以不含龙须菜藻粉且脂肪含量为12%的饲料为低脂肪对照组(L组),以不含龙须菜藻粉且脂肪含量为16%的饲料为高脂肪对照组(H组),用10%的龙须菜分别等氮替代低脂肪对照组和高脂肪对照组饲料中的鱼粉,分别标记为L-G和H-G组。用这四组饲料分别投喂8周后,H-G组黑鲷肝脏脂肪含量、肝体比、前肠脂肪酶活性、血脂含量显著低于H组。H组黑鲷血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇比L组略高,但显著高于L-G组。H-G组黑鲷肌肉甘氨酸含量显著高于其他各组。H组和H-G组黑鲷肌肉亚油酸显著高于L组和L-G组,而L组和L-G组黑鲷肌肉C18:1n9脂肪酸显著高于H组和H-G组,各组黑鲷肝脏脂肪酸含量无明显差异。H组黑鲷肝脏肝酯酶和脂蛋白酯酶活性略高于其他各组,各组黑鲷肌肉中LPL的活性无显著差异。各组黑鲷肝脏肝酯酶、肝脏和肌肉中脂蛋白酯酶基因表达无明显差异。 4.琼胶多糖对黑鲷营养生理的影响 以不含琼胶的基础饲料为对照组,以分别含有3%(Q1),6%(Q2),9%(Q3)琼胶的饲料为实验组投喂黑鲷8周后,Q3组黑鲷增重率、全鱼蛋白及全鱼脂肪含量显著低于对照组。Q2组黑鲷胃蛋白酶活性显著低于对照组。Q3组黑鲷胃蛋白酶、胃脂肪酶、前肠胰蛋白酶和脂肪酶活性、前肠碱性磷酸酶活性和血清溶菌酶活性比对照组显著下降。Q1和Q2组黑鲷胃脂肪酶活性均受到显著抑制。 Q2和Q3组黑鲷血清低密度脂蛋白胆固醇含量比对照组显著下降,Q3组黑鲷血脂含量显著低于对照组。 综上所述,本论文的研究结果显示: (1)5%龙须菜饲料能提高黄鳍鲷的免疫力,当饲料中龙须菜含量达15%时,黄鳍鲷肠道有关吸收酶和糖酶活性受到显著抑制,死亡率显著升高,但消化酶活性、肠道生理结构及生长性能未受显著影响,在15%的龙须菜饲料中添加非淀粉多糖酶可以显著提高黄鳍鲷的摄食率和存活率,在一定程度上改善黄鳍鲷对龙须菜饲料的利用率; (2)饲料中添加5%的龙须菜能提高黑鲷的抗氧化能力,当饲料中龙须菜含量达20%时,黑鲷生长性能及全鱼脂肪含量受到显著抑制,黑鲷消化免疫及抗氧化能力也受到损害。添加2‰微生态制剂可以显著缓解20%龙须菜饲料对黑鲷产生的不良影响; (3)当饲料脂肪水平不同时,龙须菜对黑鲷脂肪代谢及肌肉品质的影响程度不同。当饲料脂肪含量较高时,龙须菜对黑鲷脂肪代谢的调节作用更明显,但这种影响不是通过影响黑鲷肝酯酶和脂蛋白酯酶的活性及基因表达实现的; (4)当饲料中海藻多糖琼胶添加量达9%时,黑鲷的消化酶活性会受到抑制,进而抑制黑鲷的生长,同时还会影响黑鲷的脂肪代谢。研究成果为进一步研究海藻及海藻多糖对鱼类生理生化的影响机制奠定了基础,为研制基于海藻原料的高效配合饲料提供了理论依据。