间充质干细胞及SDF-1/CXCR4在哮喘大鼠气道炎症及气道重塑中的作用

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目的:(1)通过比较慢性哮喘大鼠和正常大鼠的外周血中间充质干细胞含量的差异,初步判断间充质干细胞与哮喘致病过程之间是否可能存在联系。(2)通过观察哮喘大鼠肺组织、气道壁SDF-1、CXCR4表达的变化,研究SDF-1、CXCR4是否参与哮喘大鼠气道炎症和气道重塑过程。通过以上实验研究,为后期静脉注射移植间充质干细胞,研究其在慢性哮喘气道炎症及气道重塑中的作用及SDF-1/CXCR4信号轴对其的影响打下实验基础。方法:(1)将18只SPF级SD雌性大鼠随机分为:正常对照组、哮喘4周组和哮喘8周组,每组6只。卵清蛋白(OVA)致敏后,雾化吸入OVA制作哮喘模型。哮喘模型成功后,测定气道压力;通过HE染色、Image-ProPlus图像分析软件分析大鼠支气管壁的嗜酸性粒细胞(ESO)浸润情况、测定支气管管腔的内周长、管壁面积、支气管平滑肌面积、平滑肌细胞核数;采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,通过流式细胞仪检测各组间充质干细胞的含量,并分析其与哮喘气道炎症及气道重塑的关系;(2)逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测各组大鼠肺组织SDF-1、CXCR4的表达变化;用免疫组织化学染色法(IHC)检测各组大鼠气道壁SDF-1表达的变化;统计数据并分析SDF-1、CXCR4与哮喘气道重塑及气道炎症的关系。结果:(1)哮喘4周组、哮喘8周组大鼠的气道反应性、气道壁EOS计数、支气管管壁面积、支气管平滑肌面积、平滑肌细胞核数目、外周血中间充质干细胞比例均较正常对照组显著增加(P<0.01或P<0.05);哮喘两组间上述指标差异显著(P<0.01);Pearson线性相关显示:各组大鼠外周血单个核细胞中间充质干细胞的含量与气道反应性、EOS浸润数、支气管壁面积、支气管平滑肌厚度及支气管平滑肌细胞核数均呈正相关(均P<0.001)。(2)RT-PCR检测结果显示哮喘4周组、哮喘8周组大鼠肺组织SDF-1、CXCR4的表达与正常对照组相比均显著增强,哮喘8周组的SDF-1及CXCR4的表达较哮喘4周组亦明显增强,差异均有统计学意义(均P<0.01);Western blotting检测结果同RT-PCR结果基本一致;免疫组织化学染色结果显示哮喘4周组、哮喘8周组大鼠气道壁SDF-1的表达较正常对照组显著增加,哮喘8周组的SDF-1的表达量亦高于哮喘4周组,差异均有统计学意义(均P<0.01);Pearson线性相关显示:各组大鼠肺组织、气道壁SDF-1、CXCR4mRNA及蛋白的表达与气道反应性、EOS浸润数、支气管壁面积、支气管平滑肌厚度及支气管平滑肌细胞核数均呈正相关(P<0.001或P<0.01)。结论:(1)间充质干细胞在哮喘状态下含量增加,可能参与了哮喘的慢性气道炎症及气道重塑。(2)SDF-1/CXCR4信号轴可能在哮喘气道炎症及气道重塑病理过程中起重要作用。
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