【摘 要】
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抗体通常是从免疫动物血液中获得的,卵黄抗体(IgY)指从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体。利用免疫鸡将特异性抗体稳定持续地传至卵黄中,制备特异性多克隆抗体,成本低且
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抗体通常是从免疫动物血液中获得的,卵黄抗体(IgY)指从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体。利用免疫鸡将特异性抗体稳定持续地传至卵黄中,制备特异性多克隆抗体,成本低且产量高,有望成为规模制备特异性抗体的有效手段。本课题主要内容是建立制备和纯化卵黄抗体的方法,并对制备出的卵黄抗体的浓度、纯度、抗原亲和力和抗原特异性进行检测。首先,建立了以水稀释硫酸铵盐析的方法纯化卵黄抗体的纯化方案,该方案不仅具有简单、经济和利于大规模生产的特点,且纯化出的卵黄抗体具有纯度高、活性好等优点。其次,选用卵黄中非特异性抗体浓度极低的无特定病原菌(SPF)鸡,有利于制备特异性卵黄抗体。以人IgG1肌肉和皮下免疫母鸡,血清检测证实免疫方案的成功。在整个34周的免疫周期内,检测了每周血清和卵黄中抗体的浓度,并计算出了卵黄抗体的理论总收率为4.695 g。间接ELISA结果表明,抗人IgG1卵黄抗体对其抗原(人IgG1)亲和常数高于3.0×108 L/M。Western blotting图表明,抗人IgG1卵黄抗体对其抗原(人IgG1)具有非常高的特异性。按照已经建立卵黄抗体的制备和纯化方案,再次制备出抗HIR-ECD卵黄抗体。血清检测的结果表明血液中产生了特异性抗体。间接ELISA结果表明,抗人HIR-ECD卵黄抗体对其抗原(HIR-ECD)亲和常数为3.4×108 L/M。
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