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目的:建立一种快速、敏感、经济的方法用于检测HBV YMDD变异,该研究采用等位基因特异性PCR检测HBV YMDD变异.方法:采用慢性乙型肝炎患者血清,通过相应引物(P<,1>、P<,2>)扩增PreS<,1>PreS<,2>S基因并分离纯化,将分离纯化的PreS<,1>PreS<,2>S基因与PUCm-TVector连接,然后转化感受态大肠杆菌JM109,获得包括YMDD位点的基因序列,再通过PCR定点突变获得YIDD和YVDD的标准品作为阳性对照.设计一对引物(P<,3>、P<,4>)用于扩增包括YMDD在内约200bp的基因片段,此外设计三条型特异性引物分别用于识别YMDD、YIDD和YVDD,通过凝胶电泳判读结果.检出突变最后通过测序进行确认.结果:该方法成功地克隆了YMDD、YIDD和YVDD标准品.采用所设计的引物对拉米夫定治疗9月的45例慢性乙肝患者血清进行YMDD变异的检测,结果检测到3例为变异株,1例为YVDD变异,另2例为混合感染(YMDD-YIDD),变异发生率为6.7﹪.测序结果显示2例为混合感染(YIDD-YVDD).结论:该方法具有特异性高、敏感性好、快速、经济,可同时检测混合变异等优点.