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肝纤维化是各种慢性肝病的共同病理基础,以细胞外基质(ECM)沉积为特征。氧化应激在肝纤维化的发生发展中起了重要作用。丙酮酸乙酯(EP)作为近年发现的一种新的有效抗氧化、抗炎物质,尤其是EP对胆汁淤积性肝纤维化的治疗作用目前尚未明确。目的(1)本实验采用胆管结扎(BDL)制备大鼠肝纤维化模型,并通过血清学和组织病理学检测证实肝功能损伤及纤维化病理改变;(2)观察EP干预后肝纤维化大鼠的肝功能改变及肝脏组织病理学改变;(3)观察EP干预后Nrf2和SOD2的蛋白表达情况,并检测Nrf2及其介导的抗氧化蛋白的mRNA表达变化;(4)观察EP干预后HMGB1、IL-1β、TNF-α及HSP27的mRNA变化,并探讨EP延缓肝纤维化进展的分子机制。材料与方法70只SD雄性大鼠随机分成3组:假手术组(Sham,n=6);胆管结扎组(BDL,n=37);胆管结扎并给予EP治疗组(EP,n=37),BDL和EP组又分别分为2w(n=10),4w(n=12)和6w(n=15)3个亚组。BDL组和EP组进行胆管结扎端离,Sham组进行相同的手术,胆管不结扎端离,EP组腹腔注射EP40mg/kg每日一次。BDL组和EP组分别在造模2w、4w、6w时分批处死大鼠,Sham组在6w时处死大鼠收集血清及肝脏标本做以下检测:(1)采用丙氨酸转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)试剂盒检测血清中ALT和AST的浓度,以此来评估肝功能损伤程度。(2)肝脏石蜡切片HE染色观察肝组织病理形态变化、Masson胶原染色观察纤维改变。(3)免疫组织化学染色检测Nrf2、SOD2、a-SMA、HMGB1、HSP27的表达情况。(4)rt-pcr检测nrf2信号通路抗氧化蛋白的mrna表达情况,炎症因子和hsp27的mrna表达情况。(5)用nrf2elisa试剂盒检测肝组织内nrf2蛋白活性,western-blot技术检测肝组织内sod2蛋白含量。(6)应用生物信息学方法检测nrf2和hsp27基因之间的相关性。(7)运用统计学软件spssstatistics22.0进行数据分析,采用单因素方差分析方法来比较均值,p<0.05作为统计学检验的标准。结果(1)本实验采用胆管结扎法成功建立大鼠肝纤维化模型。肝功能检测显示造模2w、4w及6w时血清alt、ast均显著升高,表明肝功能受损;ep干预后血清alt、ast显著下降,其中2w和4w时有统计学意义;(2)elisa与westernblot检测结果显示,与sham组相比,bdl组和ep组肝组织中nrf2、sod2含量均显著升高,而ep组大鼠肝组织中nrf2、sod2含量较bdl组高,其中4w时有统计学差异;(3)rt-pcr检测结果显示,与bdl组相比,ep组大鼠肝组织中nrf2、sod2、nqo1及gsh-px表达均显著增加,而hmgb1、il-1β、tnf-α及hsp27表达则显著降低。(4)生物信息学方法提示nrf2和hsp27基因之间通过转录因子jun和锌指蛋白36(bzfp36l1)存在间接联系。结论(1)在bdl术后2w和4w时,ep干预可减轻肝纤维化指标改变,表明ep在胆汁淤积性肝纤维化中具有抑制肝纤维化的作用。(2)bdl术后2w和4w时,ep干预可以促进nrf2、sod2nqo1和gsh-px表达。表明ep在胆汁淤积性肝纤维化早期、中期可以提高nrf2及其介导的抗氧化蛋白的活性,而肝硬化期作用不明显。(3)在胆汁淤积性肝纤维化中,HMGB1、IL-β和TNF-α表达上调,而EP可以抑制这些基因的表达,表明EP在胆汁淤积性肝纤维化中可以减轻炎症反应。(4)在胆汁淤积性肝纤维化中,HSP27的表达增强,而EP可以抑制HSP27的表达,EP的抗肝纤维化作用可能与其有关。