三维打印仿生珊瑚人工骨制备、理化性质与细胞共培养研究

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目的:1、研究三维打印仿生珊瑚人工骨材料的制备方法。2、对三维打印仿生珊瑚人工骨理化性质进行分析,验证其为符合骨缺损的移植良好的替代材料。3、研究三维打印仿生珊瑚人工骨材料与细胞共培养环境下的细胞增殖与毒性、黏附、诱导成骨作用,为三维打印仿生人工骨材料动物实验与临床试验提供研究基础。方法:利用3D生物打印机打印聚乳酸、碳酸钙、羟基磷灰石混合三维生物打印材料;三维打印仿生人工骨材料的应力-应变实验;利用XRD观察三维打印仿生珊瑚人工骨材料中的无机材料的成分;利用SEM观察三维打印仿生人工骨材料的表面结构,包括微孔、孔隙率等结构;利用EDS测定三维打印仿生珊瑚人工骨材料的元素成分;利用FTIR测定三维仿生珊瑚人工骨材料中无机材料碳酸根与磷酸根的含量。三维打印仿生珊瑚人工骨材料前体成骨干细胞共细胞培养的CCK-8测定细胞增殖与材料的毒性反应;三维打印仿生珊瑚人工骨材料与MC 3T3共细胞培养1、4、7天激光共聚焦显微镜观察肌动蛋白微丝的黏附实验;三维打印仿生珊瑚人工骨材料与MC 3T3共培养14天加入成骨诱导剂后碱性磷酸酶活力的测定,明确三维打印仿生珊瑚人工骨材料诱导成骨性能。结果:由三维生物打印机打印出仿生珊瑚人工骨材料,大小1cm X1cm X1cm;三维打印仿生珊瑚人工骨材料应力-应变实验测试极限抗压强度为15.03MPa,弹性模量为为20.51GPa。三维打印仿生珊瑚人工骨材料XRD明确了无机材料碳酸钙和羟基磷灰石成分;三维打印仿生珊瑚人工骨材料通过SEM电镜扫描显示材料孔径存在,大小均匀,孔道内部延续,孔径大小为600~800μm,结构及孔壁完整;三维打印仿生珊瑚人工骨材料通过EDS测定各元素的比值,C:19.66%、N:2.78%、O:54.42%、P:2.04%、Ca21.10%;三维打印仿生珊瑚人工骨材料通过FTIR测定明确了碳酸根和磷酸根的含量。三维打印仿生珊瑚人工骨材料与MC3T3共细胞培养1、4、7天的CCK-8测定实验组与对照组有统计学差异(P<0.05),实验组优于对照组;三维打印仿生珊瑚人工骨材料与MC 3T3共细胞培养1、4、7天激光共聚焦显微镜观察肌动蛋白微丝第7天对比第1天,肌动蛋白微丝增多,激动蛋白微丝由梭形变为圆球型;三维打印仿生珊瑚人工骨材料与MC 3T3共细胞培养14天加入成骨诱导剂后测碱性磷酸酶活力的测定实验组与对照组有统计学差异(P<0.05),实验组优于对照组。结论:1、三维打印技术可以制备出符合实验设计的仿生珊瑚人工骨材料。2、三维打印仿生珊瑚人工骨材料的力学性能、孔隙、材料成分符合骨缺损植入材料的理化特性。3、三维打印仿生珊瑚人工骨材料与细胞共培养能够得到促进细胞的增殖、黏附、诱导分化成骨性能。
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