转录因子T-bet/GATA-3在支气管哮喘中失衡表达及调节的实验研究

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【目的】1、探讨T细胞特异转录因子T-bet/GATA-3在支气管哮喘(简称哮喘)中的失衡表达,及其表达量的比值与气道炎症的相关关系。2、探讨免疫抑制剂和免疫调节剂两种不同药物干预治疗,对在哮喘中表达失衡的转录因子T-bet/GATA-3的作用,寻求通过纠正T-bet/GATA-3表达失衡的方法来治疗哮喘的新型免疫疗法。 【方法】1、48只雄性SPF级SD大鼠按随机数字表法分为对照组、哮喘组、地塞米松组和咪喹莫特组,观察4组大鼠气道反应性;气道病理改变;用免疫组化及图像分析法检测肺组织中白细胞介素(IL)-4、IL-5、干扰素-γ(IFN-γ)、T-bet和GATA-3蛋白的表达;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IL-5、IFN-γ含量;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定法检测肺组织IL-4、IL-5、IFN-γ、T-bet和GATA-3 mRNA的表达;用免疫印迹(Western blot)法检测肺组织中T-bet和GATA-3蛋白的表达。2、从致敏SD大鼠脾脏中提取淋巴细胞,用免疫磁珠分离法分离获得CD4~+T细胞,悬于RPMI-1640,接种于6孔板,每孔细胞终浓度为2×10~6个/ml,其中空白对照组(C组):细胞终浓度为2×10~6个/ml,不加任何药物干预刺激;阳性对照组(A组):细胞终浓度为2×10~6个/ml,OVA终浓度为100μg/ml;地塞米松干预组(D组):
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