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支气管哮喘是由嗜酸粒细胞、肥大细胞、T细胞等多种炎症细胞及细胞组分共同参与的慢性气道炎症性疾病,其中T细胞是最关键性的调节细胞,T细胞的过度激活及辅助性T细胞(T helper cell,Th)亚群(Th1/Th2)的功能失衡是支气管哮喘发病的重要免疫病理机制。CD4+CD28-T淋巴细胞是正常人群外周血中十分微量的T细胞群体,而在免疫炎症性疾病免疫病理中异常升高被认为是一群具有自身抗原反应性T细胞,通常倍受重视。在支气管哮喘等超敏反应性疾病中的作用和机理仍待进一步探讨。本实验通过对检测支气管哮喘儿童急性发作期、治疗前后不同时期外周血CD4+CD28-T淋巴细胞的表达情况及并分析其与临床特征、血IgE、细胞因子的相关性,探讨CD4+CD28-T淋巴细胞在支气管哮喘免疫病理中的作用。第一部分支气管哮喘儿童外周血CD4+CD28-T细胞亚群的异常表达及与临床特征的相关性目的:检测支气管哮喘儿童外周血中CD4+CD28-T淋巴细胞亚群的水平,分析CD4+CD28-T淋巴细胞亚群与哮喘儿童临床特征的相关性。方法:采用免疫荧光抗体染色及流式细胞术检测了57例支气管哮喘儿童和29例健康儿童外周血中CD4+CD28-T淋巴细胞占CD4+的百分比(CD4+CD28-T淋巴细胞百分比),并分析哮喘儿童CD4+CD28-T淋巴细胞百分比与哮喘发作轻重程度、发作频次、过敏史、家族史、治疗史及治疗后控制程度的关系,同时检测其外周血血清中IgE水平,并与CD4+CD28-T淋巴细胞百分比进行相关性分析。结果:支气管哮喘儿童外周血中CD4+CD28-T淋巴细胞百分比显著高于健康儿童对照组(P<0.05);中、重度哮喘组外周血中CD4+CD28-T淋巴细胞百分比显著高于轻度哮喘组(P<0.05);一年内发作频次越多则CD4+CD28-T淋巴细胞百分比高(P<0.05);有过敏史支气管哮喘儿童外周血中CD4+CD28-T淋巴细胞百分比显著高于无过敏史哮喘儿童(P<0.05);有家族史支气管哮喘儿童外周血中CD4+CD28-T淋巴细胞百分比虽高于无家族史哮喘儿童,但差异无统计学意义(P>0.05);既往正规治疗的支气管哮喘儿童外周血中CD4+CD28-T淋巴细胞百分比显著低于未正规治疗的支气管哮喘儿童(P<0.05);经正规治疗后症状控制的支气管哮喘儿童外周血中CD4+CD28-T淋巴细胞百分比显著低于部分控制、未控制的支气管哮喘儿童(P<0.05);支气管哮喘儿童外周血中CD4+CD28-T淋巴细胞百分比与其外周血清中IgE水平呈正相关(P值<0.01,r值为0.390)。结论:证实支气管哮喘儿童外周血CD4+CD28-T淋巴细胞异常表达,与支气管哮喘儿童的临床特征有关,并与血IgE呈正相关,可见CD4+CD28-T淋巴细胞参与了支气管哮喘免疫病理反应。第二部分支气管哮喘儿童治疗前后不同时期CD4+CD28-T细胞表达水平的变化及与血清细胞因子水平的关系目的:分析支气管哮喘儿童治疗前后外周血CD4+CD28-T淋巴细胞、CD4+T淋巴细胞及血清细胞因子的变化趋势,从而探讨治疗前后支气管哮喘患者免疫功能状态的改变及气道炎症的变化,并分析其临床意义。方法:21例支气管哮喘急性发作期儿童,根据患者病情评估不同分期予相应布地奈德雾化吸入治疗,并分治疗前、治疗后1周、后2周、后1个月、后3个月、后6个月六组、并设21例健康儿童为对照组,取哮喘患儿不同时间点血清标本采用ELISA方法检测细胞因子的水平,采用流式细胞仪检测外周血CD4+T淋巴细胞占CD3+T淋巴细胞百分比(CD4+T淋巴细胞百分比)、CD4+CD28-T淋巴细胞占CD4+T淋巴细胞百分比(CD4+CD28-T淋巴细胞百分比),并进行统计学分析。结果:1)支气管哮喘儿童经治疗后IL-4、IL-5水平呈逐渐下降的趋势,治疗前及治疗后不同时期各组比较(P<0.05),各组均显著高于健康对照组(P<0.05);而IFN-γ则呈逐渐上升趋势,治疗前及治疗后不同时期各组比较(P<0.05),各组均显著低于健康对照组(P<0.05)。2)CD4+T淋巴细胞百分比从治疗前到治疗后1个月呈逐渐下降的趋势(P<0.05);各组与健康对照组相比均显著增高(P<0.05)。而从治疗后1个月到治疗后6个月,CD4+T淋巴细胞百分比虽有下降,但各组相比,差异无统计学意义(P>0.05),与健康对照组相比,差异亦无统计学意义(P>0.05)。CD4+CD28-T淋巴细胞百分比从治疗前到治疗后6个月也呈逐渐下降的趋势(P<0.05);各组与健康对照组相比显著增高(P<0.05)。3)哮喘儿童治疗前、治疗后1周、2周外周血IL-4水平与CD4+ T细胞百分比呈正相关(P<0.05)、而从治疗前到治疗后6个月,CD4+CD28-T淋巴细胞百分比与IL-4水平呈正相关(P<0.05)。结论:1)支气管哮喘急性发作期治疗前到治疗后6个月内气道炎症逐渐降低,但仍显著高于健康对照组,故临床上需重视缓解期的治疗。2)CD4+CD28-T淋巴细胞与支气管哮喘治疗与转归密切相关。