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在缺乏氮源及非发酵性碳源存在条件下,酿酒酵母双倍体细胞进行减数分裂形成孢子。酿酒酵母孢子壁具有四层结构,从内到外依次为甘露糖层、β-葡聚糖层、壳聚糖层和二酪氨酸层。酿酒酵母孢子壁具有一定的孔径,孢子壁相关基因的缺失会使孢子壁结构疏松,孔径增大,提高底物通透性,从而影响固定化酶活性。因此可以通过基因敲除来调节孢子壁孔径大小,进而来提高固定化酶活性。本实验为了筛选孢子固定化酶最优突变株,构建了表达α-半乳糖苷酶(Mel1p)的多拷贝质粒pRS426-TEFpr-MEL1,转化酿酒酵母野生型与孢子壁缺陷型突变株,通过固定化酶活性测定,筛选出固定化酶活性最高的突变株,最终结果发现osw2?突变株孢子微囊球固定化酶活性最高。又经过固定化酶稳定性实验检测发现osw2?突变株孢子固定化酶稳定性好,因此osw2?突变株是筛选到的孢子固定化酶最优突变株。文献报道OSW2基因参与孢子壁的组装,但具体功能目前还不清楚。为了研究AN120野生型与osw2?突变株酵母孢子壁的孔径大小,本实验分别选取蜜二糖(二糖)、棉子糖(三糖)与水苏糖(四糖)三种低聚寡糖作为α-半乳糖苷酶的底物,通过检测两种菌株孢子固定化酶对这三种底物的催化活性来界定孢子壁孔径大小,结果表明AN120野生型酿酒酵母孢子壁的孔径介于三糖和四糖之间;而osw2?突变株酿酒酵母孢子壁的孔径大于四糖,很可能小于五糖。孢子微囊球作为固定化酶的载体其中一个优势就在于孢子壁会为固定化酶提供保护。为了研究孢子对固定化酶的保护性,本研究分别用2%和10%SDS处理AN120野生型与osw2?突变株孢子固定化酶并以游离酶作为对照,结果发现孢子固定化酶可以完全抵抗2%SDS的处理,部分抵抗10%SDS的处理,游离酶经SDS处理后失活。表明孢子微囊球确实能够很好地保护固定化酶免受一定的外界刺激。尿素作为低相对分子质量的化合物,会使蛋白质变性,本实验研究孢子固定化酶能否抵抗尿素的处理,实验通过8 mol·L-1尿素处理野生型与osw2?突变株孢子固定化酶,进行酶活测定与蛋白免疫印迹分析,结果发现野生型孢子经过尿素处理后仍然能够较好的保持固定化酶的含量与活性,但osw2?突变株孢子固定化酶含量与活性降低很多。表明了OSW2基因的缺失,导致孢子壁脆弱,不能够抵抗尿素的处理。