兔增殖性玻璃体视网膜病变视网膜蛋白质组学的初步研究

来源 :重庆医科大学 重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lequ123123
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目的:( 1 )建立兔增殖性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy , PVR)动物模型;( 2 )采用双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)/高效液相色谱芯片串联质谱(high-performance liquid chromatography and tandem mass spectrometry using a chip cube nano-flow system ,HPLC-Chip–MS/MS system)和Western blot方法筛选、鉴定PVR兔视网膜与正常兔表达有差异的蛋白,为探讨PVR的发病机制寻找新的突破口。方法:(1)采用部分玻璃体切除+造成裂孔和视网膜脱离后饲养8周的方法建立PVR动物模型;(2)获取实验组和对照组视网膜标本并用clean-up kit处理视网膜标本;(3)运用2-DE对视网膜蛋白进行二维分离;(4)采集凝胶图像,以PDQuest软件进行图像分析,寻找有意义的差异蛋白点;(5)将差异蛋白质点挖出、酶解,进行HPLC-Chip–MS/MS鉴定;( 6 )使用Mascot软件在UniProtKB/SWISS-PORT数据库中搜索鉴定差异表达蛋白,生物信息学分析,得到差异蛋白的相关肽段的MS/MS质谱图;(7)对鉴定出的、有意义的差异蛋白aB-晶状体蛋白运用Western blot方法进行一步验证。结果:(1)八周后,行部分玻璃体切除+造成裂孔和视网膜脱离的18只眼中,有3只眼诱导出了PVR B级, 3只眼诱导出了PVR C级。对照组中6只眼无一只眼诱导出PVR;(2)运用2-DE分离出PVR与正常兔视网膜的差异蛋白点,经PDQuest8.0软件进行分析后,筛选10个表达有差异的蛋白点,运用HPLC-Chip–MS/MS进行分析鉴定,发现有8个蛋白在PVR组表达上调。其中满足①肽评分>8;②SPI(Structure predictability index for protein sequences) (%)>70%;③分子量及等电点与双向电泳的结果相符的蛋白有2个,即aB-晶状体蛋白(Alpha-crystallin B chain - Oryctolagus cuniculus)和aA-晶状体蛋白(Alpha-crystallin A chain - Oryctolagus cuniculus)。(3)Western blot显示,aB-晶状体蛋白在PVR B、C级的视网膜中检测到,而在正常对照视网膜中未测到。结论:aB-晶状体蛋白为PVR的潜在生物标志物,可能在PVR的发生、发展中起着重要作用。
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