SrO/nHA骨缺损修复材料复合非人灵长类骨髓间充质干细胞的体外生物学研究

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目的:先前工作中,课题组人员已对放电等离子烧结(spark plasma sintering,SPS)法制备的不同质量浓度比锶(Strontium,Sr)的氧化锶(strontium oxide,Sr O)/纳米羟基磷灰石(nano-hydroxyapatite,n HA)复合材料进行了制备工艺、表征、孔隙率、孔径大小等一系列实验研究,发现含Sr质量浓度比为3%~7%之间的Sr O/n HA复合材料具有很好的降解和沉积矿化性能。根据生物材料和医疗器械生物学评价标准(ISO 10993),本文将对不同质量浓度比Sr的Sr O/n HA复合材料进行体外生物学性能(细胞相容性和成骨活性)进行评价,并筛选出含Sr量最佳的Sr O/n HA复合材料。方法:通过SPS法制备不掺Sr的0%Sr O/n HA复合材料和掺1%、3%、5%和7%Sr的Sr O/n HA复合材料。然后将它们分为6组,分别为空白对照组、0%组、1%组、3%组、5%组和7%Sr O/n HA组。首先以这几组为基础,将研究Sr O/n HA复合材料细胞相容性的实验分为两部分。实验1:选用0%、1%、3%、5%和7%Sr O/n HA组5个材料组,直接黏附猕猴骨髓间充质干细胞(rhesus monkey bone marrow derived mesenchymal stem cells,RMBMSCs)。24h后计算RMBMSCs的贴壁率,并于1d、4d和7d后利用扫描电子显微镜(SEM)观察不同时间点5种材料对RMBMSCs黏附的影响。实验2:为避免材料表面性能对RMBMSCs黏附数量的影响,制备5种材料的浸提液。然后结合空白对照组,利用WST-1法和流式细胞仪分析不同材料不同时间点对RMBMSCs增殖和凋亡的影响。最后,根据以上两部分实验结果,筛选出一种含Sr质量浓度比最佳的Sr O/n HA复合材料。然后,将其结合空白对照组和0%Sr O/n HA组,分别将RMBMSCs接种于6孔板底面和材料表面,使用q RT-PCR法和茜素红染色法比较三组的RMBMSCs成骨分化和细胞外基质矿化。结果:(1)综合RMBMSCs的黏附、增殖和凋亡三方面的实验结果,发现在本实验研究中3%Sr O/n HA复合材料具有更好的细胞活性。(2)RMBMSCs的成骨分化实验结果显示Sr元素存在的3%Sr O/n HA复合材料上调了成骨细胞相关基因(Runx2、SP7、ALP、OCN、OPN)的表达和下调了破骨细胞相关基因(OPG、RNAKL和OPG/RNAKL)的表达,从而促进了RMBMSCs向成骨细胞分化。另外,通过细胞外基质的矿化实验,结果未显示出三组之间有显著性差异,但都出现细胞外基质的矿化。结论:(1)SrO/nHA复合材料具有很好的细胞相容性,成骨活性仍需进一步研究。(2)在本课题的研究中,当Sr的质量浓度比为3%时,Sr O/n HA复合材料的细胞相容性最好,并能促进RMBMSCs的成骨分化。
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