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食源性疾病是威胁全球公共卫生的重要因素,对人类健康造成了严重的影响与危害。其中食源性致病菌是引起食源性疾病的主要原因。传统的食源性致病菌检测方法通常在操作步骤和过程上耗时耗力,且在灵敏度和特异性上都有一定的缺陷。因此,发展更为快捷方便、灵敏度高和特异性好的检测方法对保障食品安全具有重要意义。表面增强拉曼光谱(SERS)是一种具有高灵敏度的无损快速检测技术,基于拉曼“热点”作用,制备具有良好SERS效应的基底是SERS技术发展的关键。选择一种稳定、经济的SERS基底固态支撑材料应用于食源性致病菌的快速检测具有十分重要的意义。本研究以纳米金颗粒作为SERS基底,以适配体作为识别分子。构建基于适配体功能化聚二甲基硅氧烷(PDMS)-SERS检测食源性致病菌的方法,并应用于实际样品检测。主要工作内容包括:首先,构建一种基于适配体功能化PDMS膜“夹心式”检测副溶血性弧菌的方法。首先利用食人鱼溶液(piranha)以及3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)对PDMS膜表面进行化学改性,并连接纳米金颗粒制备得到Au-PDMS膜。然后,利用金硫键将适配体固定于Au-PDMS膜形成捕获基底。同时,制备了拉曼信号分子巯基苯甲酸(4-MBA)与副溶血性弧菌适配体同时修饰的纳米金颗粒作为信号分子探针。当靶标存在时,基于适配体与靶标的特异性结合,形成“捕获基底-靶标-信号分子探针”的夹心结构,通过测定拉曼强度从而实现对副溶血性弧菌的检测。结果表明,在最优实验条件下,副溶血性弧菌在1.2×102 cfu/mL1.2×106 cfu/m L范围内与4-MBA在1592 cm-1位移处的相对拉曼强度呈现良好的线性关系(y=544.68x-944.13,R2=0.9948),最低检测限为12 cfu/m L。将该方法应用于实际虾肉样品检测,结果与平板计数法的检测结果无显著差异,表明该方法准确可靠。其次,构建一种基于适配体免固定化Au-PDMS膜检测副溶血性弧菌的方法。为进一步提高检测的便捷性,首先通过PDMS前聚体还原氯金酸制备Au-PDMS膜。接着将半胱胺通过金硫键连接于Au-PDMS膜使其表面带正电荷。然后,将信号分子探针(4-MBA通过金硫键连接适配体修饰的纳米金颗粒)通过静电作用吸附于膜表面。当靶标存在时,基于适配体与靶标的特异性结合,信号分子探针与靶标特异性结合并从膜表面脱落,通过测定拉曼强度变化从而实现对副溶血性弧菌的检测。结果显示,在最优实验条件下,副溶血性弧菌在3.3×102 cfu/m L3.3×106cfu/m L范围内和4-MBA在1592 cm-1位移处的相对拉曼强度呈现良好的线性关系(y=650.78x-1063.2,R2=0.9913),最低检测限为33 cf u/m L。将该方法应用于实际虾肉样品检测,结果与平板计数法检测的结果相比无显著差异,表明该方法准确可靠。最后,构建一种基于适配体功能化PDMS膜同时检测两种致病菌的方法。首先,将两种适配体通过金硫键固定在上述研究制备得到的Au-PDMS膜上,作为固态双重捕获基底。然后,制备4-MBA、尼罗蓝A(NBA)分别修饰的两种信号分子探针。当靶标存在时,基于适配体与靶标的特异性结合,形成双重“捕获基底-靶标-信号分子探针”的夹心结构,通过测定拉曼强度从而实现对双靶标的检测。结果表明,在最优实验条件下,副溶血性弧菌在2.5×102 cfu/m L2.5×106 cfu/m L范围内和4-MBA在1592 cm-1位移处的相对拉曼强度呈现良好的线性关系(y=567.24x-485.86,R2=0.9883),最低检测限为25cfu/m L。鼠伤寒沙门氏菌在4.5×102 cfu/m L4.5×106 cfu/mL范围内和NBA在592 cm-1位移处的相对拉曼强度呈现良好的线性关系(y=324.57x-514.03,R2=0.9892),最低检测限为45 cfu/mL。将该方法应用于实际虾肉样品检测,结果与平板计数法检测的结果相比无显著差异,表明该方法准确可靠。