第一部分 非输血依赖型地中海贫血患者铁过载相关指标分析目的研究非输血依赖型地中海贫血患者全身铁过载及肝脏、心脏铁过载状况,探讨其与临床相关检测指标之间的关系。方法收集2013年6月到2013年12月110例年龄≥10岁的非输血依赖型地中海贫血患者的临床资料,电化学发光法检测血清铁蛋白(serum ferritin,SF)、核磁共振技术检测肝脏R2值及心脏T2*值,并对其相关临床资料、检验结果进行比较分析。结果1.110例年龄>10岁的非输血依赖型地中海贫血患者中男性65例,女性45例,患者中位年龄24岁(范围10-63岁),首次输血中位年龄8岁(范围1-45岁),29例(26.4%)有祛铁治疗史,首次祛铁年龄24岁(范围3-59岁)。87例(79.0%)患者有输血史,输血总量中位值6个单位(范围0-132单位),患者平均Hb为87.7 ± 15.6 g/L,肝肿大35例(31.8%),脾肿大34例(30.9%),行脾脏切除术为49例(44.5%)。SF中位值为1105 ng/ml(范围 36-19704 ng/ml),59 例(53.6%)患者存在铁过载(SF>1000 ng/ml),其中轻中度铁过载(1000 ng/ml<SF<2500 ng/ml)为43例(39.1%),重度铁过载(SF≥2500 ng/ml)为16例(14.5%)。β-地中海贫血及HbE/β-地中海贫血患者的SF水平明显高于HbH病患者(P=0.001)。2.110例患者肝脏铁含量平均值为13.4±11.7 mg Fe/g干重,93例(84.5%)患者存在肝脏铁过载,其中28例(25.5%)为轻度肝脏铁过载(3 mg Fe/g干重≤LIC<7 mg Fe/g干重),29例(26.4%)为中度肝脏铁过载(7 mg Fe/g干重≤LIC<15 mg Fe/g干重),36例(32.6%)为重度肝脏铁过载(LIC≥15 mg Fe/g 干重)。以 SF 1000 ng/ml 为界分组,SF≥1000 ng/ml 的患者其肝脏铁含量明显高于SF<1000 ng/ml的患者(20.7±11.5 mg Fe/g干重VS 5.0±3.4mg Fe/g干重,P<0.001)。β-地中海贫血及HbE/β-地中海贫血患者的肝脏铁含量明显高于HbH病患者(P<0.001)。3.110例患者心脏T2*值平均值为33.8±10.4 ms,6例(5.5%)患者存在心脏铁沉积,其中轻中度心脏铁沉积(10 ms≤脏T2*值<20 ms)为5例(占4.5%),重度心脏铁沉积(心脏T2*值<10 ms)为1例(约占1.0%),正常(心脏T2*值>20 ms)为104例(占94.5%)。HbH病患者的心脏T2*值与β-地中海贫血及HbE/β-地中海贫血的心脏T2*值比较,未见统计学差异(P=0.083)。4.Spearman相关分析显示,患者SF水平与年龄、ALT、AST呈正相关(R=0.413,P<0.001;R=0.715,P<0.001;R=0.538,P<0.001),肝脏铁含量与年龄、ALT、AST 呈正相关(R=0.410,P<0.001;R=0.608,P<0.001;R=0.531,P<0.001),SF 水平与肝脏铁含量呈正相关(R=0.808,P<0.001)。多重线性回归分析显示,患者SF水平与年龄(β=0.523,P<0.001)、输血总量(β=0.281,P=0.001)、疾病类型(β=0.298,P=0.001)、脾切(β=0.347,P<0.001)呈正相关。LIC水平与年龄(β=0.483,P<0.001)、输血总量(β=0.289,P=0.002)、疾病类型(β=0.388,P<0.001)呈正相关。结论1.非输血依赖型地中海贫血患者肝脏铁过载严重,但心脏铁沉积不明显。其中β-地中海贫血及HbE/β-地中海贫血的肝脏铁过载较HbH病严重。2.非输血依赖型地中海贫血患者的血清铁蛋白水平可能低估了患者铁过载的风险,血清铁蛋白并不能正确的反应肝脏铁过载的状态,因此,我们建议用肝脏铁含量直接评估非输血依赖性地中海贫血患者铁过载程度。3.年龄、疾病类型、输血总量是影响非输血依赖型地中海贫血患者血清铁蛋白和肝脏铁含量的共同因素,其中年龄为主要因素。4.非输血依赖型地中海贫血患者肝脏铁过载可能会导致肝损伤、肝功能异常。第二部分 非输血依赖型地中海贫血患者血清肝纤维化指标与铁过载关系的对照研究目的 研究非输血依赖型地中海贫血(non-transfusion-dependent thalassemia,NTDT)患者血清肝纤维化标志物表达情况,初步探讨血清肝纤维化标志物与铁过载之间的关系。方法收集105例NTDT患者及139例重型β地中海贫血(β-thalassemia major,TM)患者的血清标本,检测其血清Ⅳ型胶原(collagen type Ⅳ,C Ⅳ)、Ⅲ型前胶原氨基端肽(precollagen type Ⅲ,PIIINP)、透明质酸(hyaluronic acid,HA)、AST、ALT以及血清铁蛋白(serum ferritin,SF)水平,同时选取120例健康人作为正常对照组。所有受试者均排除乙型肝炎及丙型肝炎病史。血清肝纤维化水平采用时间分辨荧光免疫分析法测定,血清ALT及AST含量采用生化法检测。此外,电化学发光法检测血清铁蛋白水平,磁共振R2技术测定肝脏铁含量(liver iron concentration,LIC)。结果血清C Ⅳ及HA水平在NTDT组及TM组显著高于正常对照组(P<0.05),其中89.5%的NTDT患者及所有TM患者血清C Ⅳ水平高于正常对照组(P<0.05),66.7%的NTDT患者及98.6%TM患者血清HA水平高于正常对照组(P<0.05)。血清PIIINP表达水平在TM组中明显高于正常对照组P<0.05),但在NTDT组中与对照组则无统计学差异(P>0.05),其中72.4%的NTDT患者及91.4%TM患者血清PIIINP水平高于正常对照组。此外,血清CⅣ、HA及PIIINP表达量在TM组中明显高于NTDT组(P<0.05)。相关分析显示,血清铁蛋白水平与血清C Ⅳ(R=0.194,P=0.002),PIIINP(R=0.183,P=0.004),HA(R=0.435,P<0.001),ALT(R=0.681,P<0.001)和 AST(R=0.565,P<0.001)呈正相关。肝脏铁含量与血清 C Ⅳ(R=0.175,P=0.039),PIIINP(R=0.334,P<0.001),HA(R=0.528,P<0.001),ALT(R=0.693,P<0.001)和 AST(R=0.604,P<0.001)水平呈正相关。结论1、非输血依赖型地中海贫血患者血清肝纤维化指标明显低于重型β地中海贫血患者但高于正常对照组,血清肝纤维化指标与铁过载程度呈正相关,我们推测,铁过载可能导致非输血依赖型地中海贫血患者肝脏纤维化改变。2、血清CⅣ、PIIINP、HA可能成为临床上评估非输血依赖型地中海贫血患者铁过载所致肝脏纤维化风险的重要指标。第三部分 血红蛋白H病患者基因型及临床表型与铁过载关系的研究目的探讨血红蛋白H病患者基因型及临床表型与铁过载的关系。方法2013年6月至2014年12月共收集130例HbH患者的临床资料,包括首次输血年龄、发病年龄、身高、体重等,对130例经血常规、血红蛋白电泳及地中海贫血基因分析诊断为HbH的患者行血清铁蛋白(serum ferritin,SF)检测,其中77例患者行肝脏铁含量(liver iron overload,LIC)检测、65例患者行心脏T2*值的检测,并对其结果进行统计分析。结果1.130例HbH病患者,男性72例,女性58例。患者中位年龄23岁(范围2-63岁),肝脏肿大27例(20.8%),脾脏肿大55例(42.3%),行脾脏切除31例(23.8%),输血总量中位值为5个单位(范围0-88个单位)。SF 中位值为 533 ng/mL(范围 27-19704 ng/mL),35 例(26.9%)患者SF≥1000 ng/mL,其中 6 例患者(4.6%)SF≥2500 ng/mL。77 例患者行肝脏磁共振检查,LIC中位值6.6 mg Fe/g干重(范围0.6-43.0 mg Fe/g干重),56例(72.7%)患者存在肝脏铁过载(LIC≥3 mg Fe/g干重),轻度20例(26.0%),中度21例(27.3%),重度15例(19.4%)。SF及肝脏铁过载最小年龄均为4岁。肝脏铁过载发生率明显高于SF铁过载发生率(72.7%VS 26.9%,P<0.001)2.130例患者按临床表型分为轻度59例(45.4%)、中度41例(31.5%)、重度 30 例(23.1%),SF 在轻度患者为 465 ng/mL(范围 27-3544 ng/mL),中度患者为573 ng/mL(范围36-6128 ng/mL),重度患者为720 ng/mL(范围132-19704 ng/mL),且SF在轻度、中度、重度三组比较有统计学差异(P<0.05),经Spearman相关分析,患者临床表型的轻度、中度、重度与血清铁蛋白分度呈正相关(R=0.322,P<0.001),与肝脏铁含量、心脏T2*值均未见相关性(R=-0.020,P=0.865;R=-0.101,P=0.423)。3.130例HbH病患者缺失型为30例(23.1%),非缺失型100例(76.9%)。非缺失型患者SF水平及肝脏铁含量均明显高于缺失型患者(P<0.001),但其心脏T2*值比较未见明显统计学差异(P>0.05),且130例HbH病患者中有4例发生心脏铁过载,均为非缺失型HbH病患者。100例非缺失型患者临床及血液学指标与铁过载指标比较发现,SF水平在脾切组及祛铁治疗组明显增加(P<0.05),SF水平与患者年龄、Hb水平、ALT均呈正相关(R=0.383,P<0.001;R=0.294,P=0.003;R=0.514,P<0.001)。同时,LIC在祛铁治疗组明显增加(P<0.05),LIC水平与患者年龄、ALT、AST水平均呈正相关(R=0.467,P<0.001;R=0.600,P<0.001;R=0.272,P=0.028)。心脏T2*值在各组比较均未见明显差异(P>0.05)。4.血清铁蛋白中位值在脾正常、脾肿大、脾切除三组分别为439 ng/mL(范围 27-3774 ng/mL)、409 ng/mL(范围 132-229 ng/mL)、1004 ng/mL(范围145.7-19704 ng/mL),三组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Hb中位值在脾正常、脾肿大、脾切除三组分别为93.5 g/L(范围77.3-118.9 g/L)、81.6 g/L(范围 33.8-117.0g/L)、98.0 g/L(范围 40.9-117.0g/L),三组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论1.HbH病患者的肝脏铁过载严重,且铁过载发生早。2.非缺失型HbH病患者的发病早,贫血程度重、肝脾肿大明显、铁过载风险高,临床上应早期监测血清铁蛋白和肝脏铁含量。3、HbH病患者临床表型与血清铁蛋白水平呈正相关,患者血清铁蛋白水平越高,临床表型越重。4.脾切除能够改善HbH病患者贫血症状,但可能会加重患者铁过载的风险,因此脾切除以后要注意定期监测患者血清铁蛋白水平。第四部分 沙鼠铁过载模型的建立及铁过载致脏器损伤的研究目的建立沙鼠铁过载模型,研究铁过载对动物心脏及肝脏损伤情况,探讨铁过载致脏器损伤的机制。方法对沙鼠分别注射右旋糖酐铁(200mg·kg-1.week-1)或注射同等剂量生理盐水比较观察下列指标:血清学检测,肝脏铁浓度(liver iron concentration,LIC)测定,心、肝组织 HE、Prussian-blue、Masson 染色,电镜超微结构观察,组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase activety,GPX)活性检测。结果与正常对照(normal control,NC)组比较,铁过载模型(iron overload,IO)组各血清学指标及LIC变化明显,组织学显示心肌细胞、肝细胞损伤、铁沉积、纤维化程度随铁剂注射时间延长而加重,电镜观察可见大量铁沉积溶酶体,线粒体损伤明显,MDA含量明显增加(P<0.05),GPX活性明显下降(P<0.05),呈铁剂注射时间依赖性。结论1.沙鼠腹腔注射右旋糖酐铁,可以成功建立铁过载模型。2.沙鼠铁过载可致其心脏、肝脏等多脏器广泛损伤。3.铁过载引起的多脏器广泛损伤和间质纤维增生可能与自由铁介导的脂质过氧化损伤及铁沉积引起组织压迫与闭塞有关。