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子宫内膜是卵巢激素作用的靶组织,在生殖生理的研究中占有重要的地位。孕酮和雌激素的联合作用使子宫内膜细胞在妊娠期发生形态及生物化学的变化,这种变化不仅表现在上皮细胞、间质细胞,同时还表现在其增殖及分泌的改变,此时子宫内膜变为分泌性内膜。对子宫内膜细胞进行体外培养,探讨子宫内膜细胞分离与体外培养条件、生长特点及其增殖过程,从而为子宫内膜基质细胞和上皮细胞分离与培养体系的完善打下基础,这将为进一步研究子宫内膜细胞在子宫局部免疫中的作用提供理论依据。本试验采用不同的消化方法获取孕早期家兔子宫内膜细胞,通过原代培养、传代培养、细胞鉴定等试验,观察孕早期家兔子宫内膜细胞在体外培养过程中的生长特性,并通过激素刺激法探讨激素对子宫内膜细胞生长增殖的促进作用,结果表明:1. 采用Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶消化分离均获得接种量的原代培养物,采用胰蛋白酶消化获得的细胞少,活力低;而用1 g/LⅠ型胶原酶消化获得的细胞数量多达5×106个,活力大于90%,接种培养24 h后,细胞基本贴壁,4-5 d可汇合形成单层。2. 经74 μm(200目)滤网过滤可将基质细胞和腺体细胞分离,依据是基质细胞可以通过滤网,而腺体细胞由于是腺管不能通过滤网。3. 在倒置显微镜下观察培养的细胞,腺上皮细胞形似蝌蚪,多呈漩涡状,成团逐渐向外生长,细胞核圆形;间质细胞在培养过程中逐渐伸直延长,呈现中间宽,两端尖的纺锤形,细胞核呈卵圆形。细胞间存在接触抑制,4-5 d细胞汇合后处于相对静止状态。4. 与M-199、RPMI-1640培养基相比,DMEM/F12(1:1)培养基更适合作培养子宫内膜细胞的基础培养液。5. 生长液中加入10 μg/mL胰岛素,可以明显促进子宫内膜细胞的生长和增殖。6. 利用免疫组织化学染色法分别对腺上皮细胞和间质细胞作初步鉴定,用鼠抗兔角蛋白单克隆抗体作SP免疫细胞化学染色,凡细胞胞质染成棕黄色的证明为角蛋白阳性细<WP=6>胞;用鼠抗兔波形蛋单克隆抗体作SP免疫细胞化学染色,凡细胞胞质染成棕黄色的证明为波形蛋白阳性细胞。以子宫内膜细胞作阳性对照,PBS代替第一抗体作阴性对照。7. 传代的子宫内膜细胞接种后有18-24 h的滞留期,然后进入对数生长期,可持续2-4 d,第7天进入平台期,第8天开始脱落。8. 妊娠早期的子宫内膜较其它时期的子宫内膜易培养,生长增殖迅速,而且获得的腺体细胞较多。