论文部分内容阅读
乳及乳产品因为含有丰富的营养而深受人们的喜爱,然而,乳及乳制品中的蛋白又是一类常见的食物过敏原。牛乳过敏严重影响着部分人群的健康和生活质量,流行病学调查显示,高达8%的婴幼儿和1%-2%左右的成人对牛乳过敏。因此,开展牛乳过敏的研究具有重要的理论和现实意义。牛乳中包含多种过敏原,主要包括酪蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白等。本研究以β-乳球蛋白为例,设计一条高纯度高产量纯化制备β-乳球蛋白的技术路线。根据小试分离纯化的结果,进行β-乳球蛋白的克级规模化的制备放大设计,并对设计调试后的产品进行部分理化性质和免疫学性质的表征。研究的主要结果及结论如下。1.采用Sephadex G-75凝胶层析及DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析从牛乳中分离纯化β-乳球蛋白,SDS-PAGE鉴定结果表明,小试分离得到了纯度达99%的牛乳β-乳球蛋白,得率为34.46%。2.在获得Sephadex G-75凝胶层析及DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析小试操作参数的基础上,进行β-乳球蛋白制备的克级规模化的设计,包括设备选型、工艺平面流程图和设备平面流程图。3.调试适用于中试规模生产的放大工艺,并进行2次重复试验,以验证β-乳球蛋白纯化工艺的重复性。4.对放大试验的产品品质进行评估,SDS-PAGE鉴定结果表明其纯度达99.7%,得率为38.02%；通过圆二色谱(CD色谱)鉴定二级结构,并与小试样及标准品对比,结果发现,它们的二级结构基本没变化；通过间接竞争ELISA评估β-乳球蛋白的抗原性,结果发现中试和小试纯化的蛋白抑制曲线相稳合,表明中试纯化的β-乳球蛋白较好地保留了抗原性。5.成功地完成了制备牛乳主要过敏原β-乳球蛋白的规模化设计,调试结果表明该设计可以满足高纯度β-乳球蛋白的克级化规模制备要求。