背景和目的冠状动脉粥样硬化性心脏病（coronary heart disease,CHD）是冠状动脉发生粥样硬化性病变阻塞血管,造成心肌缺血、缺氧或坏死而导致的心脏病,目前已成为全球重大公共卫生问题。痰瘀互结证是冠心病常见证型,研究显示,血瘀证（28.1%）、痰浊证（14.69%）在冠心病标实证中分别占第一和第二位,且二者比例呈持续上升态势。活血化痰法是冠心病痰瘀互结证的正治之法,丹蒌片是治疗痰瘀互结型胸痹心痛的常用中成药,由瓜蒌、薤白、葛根、川芎、丹参、赤芍等中药组成,具有化痰散结、活血化瘀之效。研究显示,中成药上市后不可避免地面临用药病例数增多、使用范围广、不良反应频次增大等问题,对其安全性及有效性的评价仍有重要意义。加之目前丹蒌片的多数临床研究存在随机方法、分组隐匿、盲法等方法学问题,可能影响试验结果解读的准确性。故本次试验拟利用随机双盲安慰剂平行对照的试验设计,通过观察冠心病痰瘀互结证患者在丹蒌片治疗前后,心绞痛发作频率及持续时间、急救药物减停率、中医证候积分及单项症状体征、炎症指标、血脂水平、西雅图心绞痛量表评分、心电图疗效、血常规及肝肾功能变化等,进一步评价丹蒌片治疗冠心病痰瘀互结证的临床疗效及安全性。实验二对其机制进行初步探索性研究,课题组前期利用二代高通量测序技术筛选出与冠心病痰瘀互结证相关性较高的NOD样受体信号通路,其中CCL2可作为冠心病痰瘀互结证的潜在生物标志物。NOD样受体信号通路是介导先天免疫及炎症反应的重要通路,NOD2受体及其下游RIP2、JNK等相关分子的激活可以促进CCL2的转录与活化,CCL2与其受体CCR2的结合可促进单核细胞募集,并诱导、调节其它炎性介质的产生和释放,在动脉粥样硬化等病理中发挥重要作用。基于团队前期工作及文献研究,选取与冠心病相关的NOD2/RIP2/JNK炎症通路中的NOD2、RIP2、TAK1、JNK、CCL2及CCR2作为检测基因,利用RT-qPCR技术检测该信号通路及下游目的基因表达变化情况,采用ELISA法检测外周血血清CCL2蛋白水平的变化。方法1丹蒌片治疗冠心病稳定型心绞痛痰瘀互结证的随机双盲安慰剂平行对照试验选择经冠脉造影或CTA证实的冠心病稳定型心绞痛痰瘀互结证患者76例,采用平行区组随机化方法,按1:1比例分为试验组及对照组,每组各38例。随机过程利用网络版中央随机系统实现,研究者初步筛选出符合纳排标准的患者后在中央随机系统上录入相关信息,产生受试者编号,与患者充分沟通,确定符合标准并签署知情同意书后,点击随机分组,获得随机号。设盲方法为两级设盲法,第一级为随机号对应的干预组代号（1组/2组）,第二级为干预组代号对应的干预方式（治疗组/对照组）。正式治疗前有1周的导入期,期间停服其他治疗冠心病的中药制剂。治疗组38例予西医常规加丹蒌片治疗,对照组38例予西医常规加丹蒌片模拟剂治疗,疗程均为4周。治疗前后分别记录并统计两组患者的心绞痛疗效、急救药物减停率、中医证候积分及单项中医症状体征、hs-CRP、血脂水平、西雅图心绞痛量表评分、心电图疗效、血常规、肝肾功能等指标变化情况。使用SPSS20.0软件对观察指标进行统计分析。2丹蒌片对冠心病痰瘀互结证患者NOD2/RIP2/JNK信号通路影响的实验研究选择冠心病稳定型心绞痛痰瘀互结证患者20例,在西医常规治疗基础上加用丹蒌片治疗,在加用丹蒌片治疗前于清晨空腹状态下抽取患者外周静脉血,提取患者总RNA,加用丹蒌片治疗4周后再次抽取外周静脉血,同时提取总RNA。选取NOD2/RIP2/JNK信号通路相关基因及CCL2受体CCR2为观察指标,采用RT-qPCR 技术检测 NOD2、RIP2、TAK1、JNK、CCL2、CCR2 表达水平在治疗前后的变化,并用2-ΔΔCT公式计算治疗前后目的基因差异表达倍数。采用ELISA法检测外周血血清CCL2蛋白水平的变化。用SPSS20.0软件进行统计分析。结果1丹蒌片治疗冠心病稳定型心绞痛痰瘀互结证的随机双盲安慰剂平行对照试验本研究共纳入76例受试者,其中67例受试者完成试验,试验组33例,对照组34例,脱落率为11.84%,符合试验要求。试验组与对照组受试者在性别、年龄、吸烟史、合并病等基线资料的对比中无明显差异（P＞0.05）,两组具有可比性。（1）心绞痛疗效:药物干预后,两组患者心绞痛发作频率、持续时间均较治疗前有所下降,试验组下降程度优于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）,可认为试验组心绞痛改善情况优于对照组。（2）急救药物减停率:药物干预后,两组患者急救药物减停率差异无统计学意义（P＞0.05）。（3）中医证候积分:治疗前,两组受试者中医证候积分无显著差异;治疗后,两组中医证候积分均较治疗前降低,试验组证候积分下降更为明显,组间比较差异具有统计学意义（P=0.003）（4）单项中医症状、体征疗效:①胸痛:两组受试者共有61人出现胸痛症状,治疗后试验组胸痛有效率为73.33%,对照组为22.58%,试验组胸痛改善情况明显优于对照组（P＜0.001）;②心悸:两组受试者中共有43人出现心悸,试验组有效率为73.91%,对照组为40.00%,试验组心悸改善情况显著优于对照组（P=0.018）;③胸闷:两组受试者中共59人存在胸闷,试验组有效率为93.10%,对照组有效率为56.66%,试验组患者胸闷改善情况显著优于对照组（P=0.001）;④气短:试验过程中53人出现气短,试验组有效率为76%,对照组有效率40%,试验组患者气短改善情况显著优于对照组（P=0.007）;⑤舌苔厚腻:试验过程中63人出现舌苔厚腻,试验组有效率为50%,对照组有效率22.58%,试验组舌苔厚腻改善情况优于对照组（P=0.024）;⑥舌质紫暗:试验过程中53人出现舌质紫暗,试验组有效率为24%,对照组有效率为7.1%,无统计学差异（P=0.129）。（5）炎症指标:两组受试者治疗前hs-CRP水平差异无统计学意义（P＞0.05）,药物干预后,两组受试者hs-CRP水平均较治疗前均有所下降,且试验组下降程度高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）,可认为试验组在改善炎症反应方面优于对照组。（6）血脂水平:试验组低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、总胆固醇水平较治疗前略有升高,甘油三酯水平较治疗前下降,对照组低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、总胆固醇、甘油三酯水平较治疗前略有下降,结果表明,两组数据治疗前后均无统计学差异（P＞0.05）。（7）心电图疗效:药物干预后,两组受试者心电图疗效差异无统计学意义（P＞0.05）。（8）生活质量评价:根据西雅图心绞痛量表（SAQ）标准积分,从躯体活动受限程度（PL）、心绞痛稳定状态（AS）、心绞痛发作情况（AF）、治疗满意程度（TS）、疾病认识程度（DP）五个维度对两组受试者药物干预前后的生活质量进行评价。结果显示,试验组的PL、AS、AF、DP四项积分值较前增加（P＜0.05）,对照组的AS积分较前增加（P＜0.05）,PL、AF、TS、DP虽然呈现上升趋势,但差异无统计学意义（P＞0.05）。试验组在AS、AF两个维度积分值较对照组增加更为明显,差异有统计学意义（P＜0.05）。（9）安全性指标:治疗前后两组受试者未出现明显不良事件,生命体征未见明显异常,两组患者的血常规、肝肾功能等相关指标未见明显异常,表明丹萎片临床应用安全性良好。2丹蒌片对冠心病痰瘀互结证患者NOD2/RIP2/JNK信号通路影响的实验研究治疗后受试者NOD2表达水平是治疗前的0.65倍,表达下调;RIP2表达水平是治疗前的0.77倍,表达下调;TAK1表达水平是治疗前的0.84倍,表达下调;JNK表达水平是治疗前的0.82倍,表达下调;CCL2表达水平是治疗前的0.79倍,表达下调;CCR2表达水平是治疗前的0.63倍,表达下调。使用ELISA法对CCL2蛋白水平进行检测,纳入受试者共20例,经丹蒌片治疗前血清CCL2水平为30.46±16.83 pg/ml,治疗后为28.54±14.34pg/ml,患者血清中CCL2水平呈下降趋势,但差异无统计学意义（P=0.575）。结论丹蒌片联合西药常规治疗在改善心绞痛发作、降低中医证候积分、改善胸痛及胸闷等冠心病痰瘀互结证症状体征、降低hs-CRP水平、提高生活质量方面优于单纯西药治疗且安全性良好。丹蒌片可能通过NOD2/RIP2/JNK信号通路,下调其下游炎性细胞因子CCL2及其受体CCR2的相对表达量,抑制炎症反应,发挥治疗冠心病痰瘀互结证的作用。