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目的:研究黄连与吴茱萸及其主要成分相互配伍在抗肿瘤作用上的协同作用及机制。方法:本研究主要从以下三个方面进行:(1)活性成分配伍的体外抗肿瘤实验。黄连和吴茱萸的主要成分小檗碱与吴茱萸碱配伍给药作用于人肝癌SMMC-7721细胞,MTT法测定二者相互作用对肿瘤细胞的增殖作用,流式细胞仪检测细胞凋亡,AO:EB双荧光染色观察细胞的凋亡形态,并测定细胞上清液中TNF-α的含量及DNA ladder分析。(2)黄连和吴茱萸配伍的体内抗肿瘤实验。建立S180实体瘤模型,昆明种小鼠右腋下接种0.2 mL S180细胞悬液(5×106个/mL细胞)后,24 h后分别灌胃左金丸(850.8 mg生药材/kg)、黄连(729.2 mg生药材/kg)和吴茱萸(121.6 mg生药材/kg)提取物10 d,观察小鼠体重、脾指数,计算抑瘤率和生命延长率(ILS),检测血清中ACP、AKP、CK、ALD和LDH的酶活力,并采用免疫组化法分析P53和Bax蛋白的表达情况。(3)黄连和吴茱萸配伍逆转肿瘤细胞获得性多药耐药实验。采用PFC方案建立小鼠S180多药耐药细胞模型,将耐药后的S180细胞悬液以每只小鼠0.2 mL接种于腹腔,黄连(729.2 mg生药材/kg)、吴茱萸(121.6 mg生药材/kg)及左金丸(850.8 mg生药材/kg)提取物灌胃给药10 d,观察小鼠体重、脾指数、肝指数、生命延长率(ILS)、流式细胞仪测定P-糖蛋白(P-gp)的表达率并检测血清中肿瘤标志物的酶活力及细胞中Caspase-3蛋白的表达。结果:体外实验中发现小檗碱(0.015μmol/mL)和吴茱萸碱(0.045μmol/mL)配伍给药对SMMC-7721肿瘤细胞的增殖作用明显强于二者单独给药(P<0.01),TNF-α的表达也显著升高(P<0.05),同时,小檗碱和吴茱萸碱配伍治疗的SMMC-7721肿瘤细胞基因组DAN电泳显出高分子量的DNA片段。在体内试验中,左金丸对移植性小鼠S180肿瘤的抑瘤率为50.54%,ILS为64.91%,具有保护免疫系统功能作用,并且可显著提高小鼠血清中ACP(126.72±11.16 U/100mL)和AKP(67.27±13.49 U/100mL)的酶活力,显著降低CK(20.65±4.28 U/mL)、ALD(319.13±53.87 U/L)和LDH (1029.04±468.56 U/L)的酶活力,与黄连和吴茱萸单独给药有着显著性差异(P<0.01);此外,左金丸可显著提高P53和Bax蛋白的表达,作用强于黄连、吴茱萸单独使用。在逆转S180腹水型小鼠获得性多药耐药试验中,左金丸给药组对小鼠S180多药耐药细胞的增长有明显的抑制作用,能有效降低肝指数、提高脾指数、延长ILS (60.26%),也能有效逆转S180肿瘤细胞中P-gp的表达率(2.69%)至接近正常水平(1.65%),而显著低于模型组(16.07%),也强于黄连(5.69%)及吴茱萸(9.15%)单独给药时的逆转效果;同时左金丸能有效降低小鼠血清中ALD (75.94±12.47 U/L)和LDH (1632.92±494.48 U/L)的酶活力,提高ACP (103.28±10.36 U/100mL)和AKP (34.56±4.91 U/100mL)的酶活力,与黄连、吴茱萸给药组比较有显著性差异(P<0.01)。同时,我们采用Western Blot方法测定了给药组及对照组小鼠肿瘤细胞中Caspase-3的表达,左金丸可有效促进Caspase-3的表达,作用明显强于黄连和吴茱萸。结论:本研究揭示了:(1)左金丸主要活性成分小檗碱与吴茱萸碱对抑制SMMC-7721肿瘤细胞的增殖具有明显的配伍协同作用;(2)黄连和吴茱萸联合应用在抗小鼠S180实体肿瘤和耐药腹水型肿瘤上具有明显的配伍协同作用;(3)左金丸抗肿瘤配伍协同的作用机制可能是通过调节血清肿瘤标志物和抑癌基因的表达、促进肿瘤坏死因子TNF-α的生成和调节细胞周期变化等途径来实现的。