论文部分内容阅读
背景脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是一种严重的中枢神经系统(central nervous system,CNS)疾病,创伤性SCI(traumatic spinal cord injury,TSCI)是其中最常见的类型。TSCI可导致一系列严重的并发症,包括肺炎、肺不张、呼吸衰竭、尿路感染、肠炎、压疮、脓毒症、神经源性休克、深静脉血栓形成以及瘫痪、感觉障碍、抑郁和焦虑、排便障碍、性功能障碍、神经性疼痛、神经源性膀胱,自主神经反射异常等。总体而言,约16.2%的患者符合抑郁症(major depressive disorder,MDD)的诊断标准,但是非创伤性SCI的患病率略高于TSCI的患病率(21.1%vs.13.8%)。据估计,约30.66%的SCI患者被诊断为新发或复发MDD(中位时间74天),并且MDD是TSCI后第1年最常见(22.3%)的并发症。MDD和免疫失调有着极大的关系,健康人正常状态下的机体免疫不仅能抵抗病原微生物的袭扰,同时也可以时刻守护着我们的心理健康。结构上,MDD患者的海马体积较正常人明显变小。组织学研究也已经证实,TSCI继发抑郁样行为小鼠的海马神经元数量显著减少,小胶质细胞激活。大量基础研究表明,外周炎症在SCI后抑郁样行为的演变和进展中发挥重要作用,表现为抑郁样行为的SCI大鼠在外周血清和中枢含有更高水平的促炎细胞因子。外周和中枢免疫系统的激活容易诱发抑郁,在涉及自身免疫性疾病与免疫激活的疾病中已经得到证实,例如多发性硬化症和感染(如脓毒症)时的免疫系统激活。由此可见,创伤和炎症在SCI后抑郁样行为的演变和进展过程中产生重要影响。目的由于无法对实验动物进行抑郁量表评分,本研究基于一种新型的抑郁分类方法,旨在初步探索经行为学鉴定为TSCI继发抑郁样行为的大鼠抑郁期中枢和外周炎症的相对水平及其与抑郁样行为演变和进展的潜在联系。方法首先,我们使用一种国产打击器构建了大鼠挫伤型SCI模型。随后,采用旷场实验、社交探索实验、糖水偏好实验和强迫游泳实验在损伤后第10天,第20天和第30天左右的三个时间段对所有大鼠进行行为学评估,以损伤前行为学评估的结果为基线值,对损伤后30天左右抑郁期的行为学评分进行标准化,最后通过层次聚类方法综合评选出TSCI继发抑郁样行为的大鼠和非抑郁大鼠。期间,我们在完成所有的行为学评估过程中,依据Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)运动功能评分细则评估并记录了既定时间点每只大鼠的后肢运动恢复情况。其次,我们使用荧光单标法检测了各分类大鼠海马CA1区附近的凋亡水平,神经元存活情况以及小胶质细胞激活水平。最后,我们使用ELISA试剂盒法检测和比较了各分类大鼠之间外周血清中炎症因子的相对水平。结果在本研究中,我们成功构建了大鼠挫伤型SCI模型。BBB运动评分显示TSCI大鼠在损伤后35天内后肢的整体运动功能获得了一定程度的恢复。基于层次聚类方法,29只TSCI大鼠中有8只(约28%)被归类为抑郁组,其余21只TSCI大鼠均被归类为非抑郁组。此外,所有只接受椎板切除的6只假手术(sham)组大鼠均被归类为非抑郁组,3只非抑郁TSCI大鼠在行为学表现上接近sham组大鼠。最后,与行为学评估鉴定为非抑郁的TSCI大鼠相比,TSCI继发抑郁样行为的大鼠海马CA1区附近凋亡水平显著升高(P<0.001),神经元缺失(P<0.001),小胶质细胞大量激活(P=0.001),外周血中炎症因子TNFα(P<0.001)、IL-1β(P=0.0431)和IL-6(P=0.0074)水平显著升高;与行为学评估鉴定为非抑郁的sham大鼠相比,非抑郁TSCI大鼠海马CA1区附近神经元缺失(P<0.001),但是小胶质细胞未见明显激活,外周血中也仅有IL-1α(P=0.0279)水平显著升高。结论TSCI大鼠在行为学表现上会不断产生分化,约28%的大鼠会逐渐获得最差的抑郁相关行为学评分而被鉴定为抑郁。组织学层面,TSCI继发抑郁样行为的大鼠海马神经细胞凋亡最显著,神经元存活水平最低。TSCI继发抑郁样行为大鼠海马和外周血的炎症水平比非抑郁大鼠更高,炎症可能参与并促进了TSCI大鼠抑郁样行为的演变和进展。