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金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是临床上常见的致病菌之一,主要引起化脓性疾病和毒素性疾病。根据其血清学特征的不同,金黄色葡萄球菌能产生A、B、C、D、E、F、G、H、I和J等十多个肠毒素血清型,其中A型的毒力最强,是引起食物中毒最多的一型。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是引起人、动物感染的多重耐药菌,其有效的治疗药物为万古霉素,由于其所造成治疗上的困难,对其耐药机制的深入研究和该菌准确、及时地检出对于寻找新的治疗靶位和防止其播散有着极其重要的意义。本研究从江苏地区采集了45份动物源病料进行金黄色葡萄球菌的分离、培养与鉴定,并通过生化鉴定试验、接触酶试验、血浆凝固酶试验等对其进行了生物学鉴定,共检出金黄色葡萄球菌41株,用K-B法对该41株动物源性金黄色葡萄球菌进行了13种抗生素耐药性检测;同时,分别采用头孢西丁法、苯唑西林法和PCR法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。结果,试验菌对13种抗生素的耐药率达7.3%～75.6%,表明临床分离的金黄色葡萄球菌均表现高水平耐药和多重耐药,但均对万古霉素敏感。PCR法检测MRSA的特异性和灵敏度均为100%,头孢西丁法灵敏性为100%,特异性为96.4%;而苯唑西林法灵敏性为96.3%,特异性为89.6%,头孢西丁法操作简便,敏感性和特异性高,能够在临床实验室常规开展。为了进一步了解金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)的生物学特性,根据其已发表的基因序列,设计一对特异性引物,经PCR方法从产肠毒素A金黄色葡萄球菌株ATCC-13565扩增出SEA基因片段,并定向克隆入载体pGEM T-easy,再转化大肠杆菌DH5α;获得目的片段后,插入到表达载体pET-28a中,获得重组表达菌pET-28a-SEA。诱导表达后重组菌裂解物经SDS-PAGE及Western-blot分析证明,含有重组质粒pET-28a-SEA的大肠杆菌BL21(DE3)能够表达分子量约为30kD的融合蛋白,从而为研制抗SEA的单克隆抗体提供了抗原。本研究利用试剂盒纯化的表达产物pET-28a-SEA作为免疫原免疫3只6周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA检测,经三次亚克隆得到了稳定分泌抗SEA单克隆抗体的杂交瘤细胞株B6和G2,制备了腹水,并利用该单抗初步建立了间接ELISA和Dot-ELISA等特异性检测SEA抗原的方法。为进一步建立特异性强、敏感性高、简便快速的SEA检测方法奠定了基础。