大青叶中有机酸提取、分离及急性毒性试验

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大青叶是中国传统中药,其性苦、味寒,咸以入血,能清解血分热毒实火,尤其善于凉血斑。适用于热入营血、气血两燔、温毒发斑及咽肿口疮等证,历来为清热解毒之要药。它具有抗菌、抗癌、抗病毒、解热、抗炎、利胆、抗内毒素及增强免疫力等作用。大青叶的化学成分主要有有机酸、靛蓝、靛玉红、菘蓝苷、色胺酮、异牡荆素等化合物。对于大青叶的主要药效成分许多学者有不同的意见,主要是生物碱和有机酸之间的争论。对靛蓝、靛玉红已有不少报道和研究,但关于有机酸的研究还不是很多。本论文以大青叶为原料,粉碎后过100目筛。采用正交实验设计,研究回流法(乙醇浓度、时间、提取次数、溶剂用量)、超声法(乙醇浓度、时间、提取次数、溶剂用量)对大青叶有机酸提取率的影响;采用响应面法研究各因素对有机酸提取率的影响;并采取响应面法考察各因素在不同水平上,各因素之间相互作用对有机酸提取率的影响;采用不同类型大孔吸附树脂(D101、HPD400、AB-8、SP8-25、X-5、NKA-9、S-8)选择分离大青叶有机酸工艺(乙醇浓度、洗脱剂量、速度等)条件;建立HPLC检测大青叶有机酸含量方法;对大青叶有机酸提取物的安全性评价进行初步研究。以有机酸中的邻氨基苯甲酸为考察指标,回流与超声提取法对有机酸的提取率并没有太大影响;采用正交试验设计对回流提取法工艺进行优化,初步确定了最佳提取条件为:乙醇浓度75%,溶剂用量8倍,提取次数2次,提取时间2h;响应面法进一步确定大青叶有机酸最佳提取工艺为:乙醇浓度75%,溶剂用量10倍,提取次数2次,提取时间1.5h;从不同的打孔吸附树脂中优选出X-5为最佳;有机酸提取物上X-5大孔吸附树脂,浓度为0.18mg/ml,PH为3,洗脱流速为2BV/h,洗脱剂乙醇浓度为65%;建立高效液相梯度洗脱方法。经过小鼠急性毒性试验确定了大青叶有机酸的半数致死量为3125mg/kg.本文采用回流提取方法,在溶剂浓度、提取时间、提取次数、料液比单因素试验的基础上,采用正交试验与响应面法优化提取大青叶有机酸的最佳条件,优选大孔吸附树脂、X-5大孔吸附树脂洗涤纯化大青叶有机酸工艺。该工艺简单,减少了多糖、蛋白质、脂类等杂质对制备工艺的影响,为工业化生产提供了一定的依据。
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