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脑血管疾病（cerebrovascular diseases，CVD）以其高发病率、高死亡率、高致残率而严重危害人类健康，已成为人类三大死亡原因之一。流行病学显示，男女卒中的发病率为1.3：1～1.7：1，而绝经后两性之间无明显差别，且绝经后女性更易发生神经系统变性等疾病，而雌激素替代疗法能明显改善上述情况，因此雌激素对中枢神经系统的作用日益受到人们的重视。研究表明雌激素可能通过多种机制减轻缺血再灌注后的脑损伤，如增加缺血区脑血流量、清除自由基、直接抑制N-甲基-D-天冬氨酸受体（N-methyl-D-aspartate，NMDA）从而减轻兴奋性氨基酸毒性及降低细胞内的游离Ca++浓度等。而在雌激素对脑缺血引起的细胞凋亡影响方面的研究较少。细胞凋亡是脑缺血半暗带区细胞死亡的主要方式，挽救该区尚存活的细胞是缺血性脑血管病治疗的关键。Bcl-2是目前研究的较为深入的与凋亡密切相关的基因，它既能阻抑坏死又能阻抑细胞凋亡。Hsp70在应激时高表达，主要发挥“分子伴侣”的作用，它与变性蛋白的疏水区结合，限制其相互聚合并使已聚合的蛋白解聚，恢复正常的三级结构，从而抑制凋亡。细胞凋亡的最后实施是通过Caspase的激活而实现的，Caspase-3是Caspase大家族中的主要成员之一，是效应Caspase中目前研究最多、作用最为瞩目的一种，是哺乳动物细胞凋亡的关键蛋白酶，又被称为死亡蛋白酶。本实验的目的在于观察雌激素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后Bcl-2、Caspase-3、Hsp70表达的影响变化，阐明雌激素在脑缺血再灌注损伤中的脑保护作用，探讨其在细胞凋亡方面的作用机制。 材料和方法郑州大学2003届硕士毕业论文17日一雌二醉对大鼠脑缺血再灌注后Bcl一2、caspase一3、Hsp70表达的影响 先取20只健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组（n=4）、单纯缺血再灌注损伤组（护8）和雌二醇（estradiol，玩）治疗组（n=8）。将1 7p一雌二醇溶于精炼花生油中，高温高压消毒后避光保存。从进行大脑中动脉栓塞前7天开始，E:治疗组给予腹腔注射雌二醇（loou叭g），每日1次，假手术组和单纯缺血再灌注组给予等量精炼花生油。用线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注大鼠模型，取脑前进行行为学评分，缺血2小时再灌注 24小时后取脑做2厚冠状切片TTC染色，测梗塞体积，以判定模型是否成功，几能否减少梗塞体积。 另取72只健康雄性WIS枉甘大鼠随机分为假手术组（n=8）、单纯缺血再灌注损伤组（n=32）和几治疗组（n=32），后两组缺血2小时后根据再灌注时间又进一步分成3h、6h、12h、24h4个时间点，每个时间点各有8只老鼠。各时间点分别在再灌注3h、6h、12h、24h后断头取脑。假手术组在术后6小时取脑。各组均在取脑前对其进行行为学评分，断头取脑后包埋制成蜡块，采用石蜡冠状切片，切片厚4 pm，苏木素一伊红（hemotoxylin一eosin，H.E）染色观察组织结构，免疫组化法检测Bcl一2、Caspase-3、HsP70的蛋白表达变化。结果 1.大鼠脑缺血2小时再灌注24小时，TTC染色示雌二醇治疗组的脑梗塞体积较单纯缺血再灌注损伤组明显缩小（P<0.01），且以皮质区最为明显行为学评分。雌二醇治疗组大鼠的行为学评分，在各时间点均明显低于单纯缺血再灌注损伤组 （尸<0.01）。脑组织切片H.E染色，假手术组无梗塞灶，神经元结构、形态正常，无间质水肿。单纯缺血再灌注损伤组梗塞灶明显，广泛分布于纹状体和皮层，神经元胞体缩小，变形、核固缩，胞浆浓缩呈深伊红染色，间质水肿明显。雌二醇治疗组梗塞灶不明显，少数扩展至皮层，多数神经元结构较完整，形态相对正常，间质水肿轻。 2.在损伤区皮层，雌二醇治疗组的Bd一2表达在12小时和24小时较单纯缺血再灌注损伤组明显上调（尸<0.01），其表达随时间延长而增加，高峰在24h;在纹状体区，Bd一2的表达在雌二醇治疗组与单纯缺血再灌注损伤组间在各时间点均无显著性差异（尸>0.05），且均随时间延长而减少，均以12小时、24小时为著（p<0.01）。 3.在损伤区皮层，雌二醇治疗组的CasPase一3表达在12小时、24小时较单纯缺血再灌注损伤组明显下调（P<0，01）而在纹状体区两者的表达在各时间点无显著性差异（尸>0.05），且均随时间延长而增加。郑州大学2003届硕士毕业论文17日一雌二醇对大鼠脑缺血再灌注后Bd一2、Caspase一3、Hsp70表达的影响 4.HsP70在雌二醇治疗组的大脑皮层随时间的延长而表达增加，在12小时达高峰后，在24小时降低;单纯缺血再灌注损伤组的表达趋势和雌二醇治疗组相同，但在12小时、24小时雌二醇治疗组的表达明显上调（P<0.01）;其表达在12h达高峰后，在24h时降低。在纹状体区两组均随时间延长而减少，且两者间在各时间点无统计学差异（尸>0.05）。结论 1.雌二醇能明显减轻脑缺血再灌注损伤所造成的行为障碍，缩小梗塞体积，减轻组织病理结构损伤。 2.雌二醇保护机制可能通过上调皮层抑凋亡基因Bcl一2、Hsp7o的表达，下调促凋亡基因caspase一3的表达。 3.雌二醇有望成为新的脑保护剂。