从T辅助细胞的分化探讨银屑病辨证分型的关联机制

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银屑病属于中医“白疤”的范畴,其辨证论治的核心在于“血分论治”,临床常根据其皮疹及兼证的不同分为血热证、血瘀证、血燥证,治疗多采用凉血、活血、养血之法,临床疗效确切。银屑病发病的病因机制复杂,疾病多发于青壮年,皮疹反复难愈,红斑泛发,伴有大量鳞屑,严重影响了患者的生活质量和身心健康。本病一直是国内外皮肤科医生的研究重点和热点,近年来的研究广泛认为银屑病是多基因遗传背景下的T细胞异常的免疫疾病。本文包含文献综述和实验研究两部分。文献综述共有3篇,第一篇主要论述了中医药治疗银屑病的概况,概括了古代医家及现代医家辨证论治银屑病的中药方剂;第二篇论述了中医药治疗银屑病在T细胞相关免疫学的研究近况,概括了近年来中医辨证论治银屑病在免疫学方面的研究成果。第三篇主要论述了近年来银屑病免疫生物学的实验研究进展,从新型T辅助(Th)细胞的分化、B细胞、NK细胞、miRNA等角度,阐述各免疫指标在银屑病发病过程中的作用及关联机制。实验研究借鉴以往的研究成果,参照《中药新药临床指导原则》中的《中国银屑病治疗指南(2008)》为标准,以流式细胞术、分子生物学、免疫组化等技术为方法,从外周血及皮损双方面检测寻常型银屑病血热证、血瘀证、血燥证的免疫学指标。目的:观察寻常型银屑病在血热证、血瘀证、血燥证外周血T辅助细胞分化及其特异性相关因子表达的差异性;观察寻常型银屑病在血热证、血瘀证、血燥证皮损中细胞因子及其受体表达的差异性。初步阐明中医辨证分型的免疫学机制,分析辨证与细胞免疫紊乱的相关性,为进一步对各型银屑病筛选临床有效方剂提出靶向指标。方法:以67例寻常型银屑病患者为研究对象,依照中医辨证标准分为三证型,以流式细胞技术检测各组外周血T淋巴细胞亚群中Th细胞(CD3+CD4+)、细胞毒T细胞(CD3+CD8+)及Th细胞亚群Th1、Th2、Treg、Th17、Th22比例的差异;以Real time-PCR法检测Th细胞相关转录因子T-bet、GATA3、Foxp3、RORγt、AHR基因表达的差异;以ELISA法检测外周血血清中IFN-γ、IL-4、IL-10、TNF-α、IL-22的含量;以免疫组化技术检测各证型患者皮损中细胞因子受体IFN-γRa、IL-4Ra、IL-17R、IL-22R1及细胞因子Foxp3的含量及分布。结果:1血热证患者外周血中Thl、Th17、Th22细胞比例及其相关细胞因子INF-γ 、 TNF-α、IL-22,特异性转录因子T-bet、ROR γ t、AHR均高于正常人(p<0.05),同时Th2、Treg细胞比例及及细胞因子IL-4、IL-10,特异性转录因子GATA3、Foxp3较正常人均较正常人下降(p<0.05),血热证中Th1细胞与PASI呈正相关性(r=0.36 p=0.02);血瘀证外周血中Thl、Th17细胞比例及其相关细胞因子INF-γ、TNF-α、IL-22,特异性转录因子T-bet、RORγ t均高于正常人(p<0.05),但是Th2细胞及相关细胞因子IL-4,转录因子GATA3较正常人下降(p<0.05),Treg及Th22细胞比例及其相关因子IL-10,转录因子Foxp3、AHR较正常人无明显变化(p>0.05);血燥证外周血中Th22细胞比例及其细胞因子IL-22,转录因子AHR较正常人升高(p<0.05), Th2、Treg细胞比例及及细胞因子IL-4、IL-10,特异性转录因子GATA3、Foxp3较正常人下降(p<0.05), Th1及Th17细胞比例细胞因子INF-γ 、TNF-a,特异性转录因子T-bet、RORγ t较正常人比较无差异(p>0.05)。67例银屑病患者Thl、Th2、Treg、Thl7、Th22细胞比例相关性分析,结果显示Th1与Th17呈正相关(r=0.49, p=0.00)。 Thl细胞比例主要受到Th17细胞的影响,呈正相关;与Th2、Treg细胞呈一定的反比。银屑病血热证患者Thl、Th2、Treg、Th17、Th22细胞比例相关性分析,结果提示,Thl细胞与Th17细胞呈正相关性(r=0.46,p=0.00),与Treg细胞呈负相关性(r=-0.33,p=0.04)。血热症Th1细胞比例主要受到Th17细胞的影响,呈正相关;与Th2细胞呈一定的反比。银屑病血瘀证患者Thl、Th2、Treg、Th17、Th22细胞比例相关性分析,结果提示,Th1细胞与Th17细胞呈正相关性(r=0.55, p=0.04),Th17与Th22细胞呈正相关性(r=-0.33,p=0.04)。67例银屑病患者临床资料(年龄、病程、瘙痒程度、PAS I评分、体表面积%、DQLQ)与各T淋巴细胞亚群及Th细胞进行相关性分析,结果显示Th1与PASI、体表面积%呈正相关性(r=0.41,0.38 P<0.05),与DQLQ呈正相关性(r=0.28 P<0.05). Th2与PASI、体表面积%呈负相关性(r=-0.25,-0.29 P<0.05). Treg与DQLQ呈负相关性(r=-0.33,P<0.05)。银屑病各组Th1/Th2、Th17/Treg、Th17/Th2比值与正常人比较,结果提示三证型Th1/Th2、Th17/Th2比值较正常人显著升高,呈现血瘀证>血热证>血燥证的趋势;三证型Th17/Treg比值较正常人显著升高,呈现血热证>血瘀证>血燥证的趋势。2血热证皮损组织中出现INF-γRa、IL-17R及IL-22R1表达的升高(p<0.05),IL-4Ra及Foxp3表达较正常人下降(p<0.05); 血瘀证皮损组织中出现IL-17R表达升高(p<0.05), IL-4Ra的表达下降(p<0.05),而INF-γRa、Foxp3、IL-22R1的表达与正常人比较无差异(p>0.05);血燥证中出现IL-22R1表达较正常人升高(p<0.05), IL-4Ra及Foxp3表达较正常人下降(p<0.05),而INF-γRa、IL-17R的表达与正常人比较无差异(p>0.05)。结论:1血热证是以Thl、Th17、Th22细胞分化优势伴随Th2及Treg下调为免疫学特性,Thl细胞在血热证中对临床病情有预测作用。2血瘀证以Thl及Th17细胞分化优势同时伴随Th2细胞下调为免疫学特性,Treg、Th22细胞在血瘀证中不具有重要意义。3血燥证是以Th22细胞分化优势,而Th2与Treg细胞下调为免疫学特性,Thl及Th17细胞在血燥证中不具有重要意义。4银屑病血热证、血瘀证、血燥证中均出现了Th1/Th2及Th17/Treg平衡的偏移,银屑病各证型Th1/Th2、Th17/Treg、Th17/Th2比值与正常人比较,结果提示三证型Th1/Th2、Th17/Th2比值较正常人显著升高,其严重程度呈现血瘀证>血热证>血燥证的趋势;三证型Th17/Treg比值较正常人显著升高,其严重程度呈现血热证>血瘀证>血燥证的趋势。5银屑病血热证、血瘀证、血燥证均有Th2细胞免疫功能的下降。6 Th1、Th2细胞比例可作为评价银屑病临床病情的客观指标;Thl与Treg细胞在外周血中的含量可影响患者的生活质量评分。故由此我们可以推断银屑病以“血分论治”与Th细胞的分化有一定的相关性,银屑病的各证型可能处于不同的免疫状态中,Th细胞及其相关因子或受体的检测可在一定程度上反应各证型的生物学特性。免疫细胞紊乱是银屑病发病的重要因素。
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