背景:　　羊水细胞培养及核型分析是产前诊断的关键技术，该技术需要历经羊水细胞培养、收获、制片、显微镜下拍取核型以及核型分析等诸多步骤，以完成最终的临床报告。随着产前筛查不断普及和产前诊断需求量急速增加的状况，传统的羊水细胞培养（耗时、耗力）无法满足临床需求，且传统的羊水细胞培养步骤繁多，不宜于产前诊断质量控制。为了缩短培养时间，提高工作效率，研究人员不断探索，改进培养方法，优化流程，其中最成功的是研制自动核型扫描仪，即将显微镜与自动进片的轨道相连接，以实现24小时无人值守全自动换片、取片、扫描、滴油、采集核型。该自动核型扫描仪在外周血培养核型捕获中显示快速、省力的极好效果，但不能移植到羊水染色体核型捕获中，问题在于羊水原位培养的细胞贴壁于25×25cm的塑料培养瓶，塑料瓶底片不平整、厚度太高，显微镜无法自动调节焦距自动扫描捕获。羊水细胞培养要实现自动化阅片，首要问题是解决细胞在载玻片上原位培养。如何实现羊水活性细胞在载玻片上贴壁、原位收获、分散、消化染色，达到标准条带，是非常难以克服的技术，其涉及染色体分散动力学、表面张力、培养性能等多方面因素。　　目的:　　本研究以载玻片为培养载体，以3-氨丙基-3-甲氧基硅烷(3-Aminopropyl-Triethoxysilane，APES)为细胞黏附剂，自制载玻片培养瓶。探索载玻片上染色体核型分散的影响因素，染色体分散的质量评估体系，建立载玻片原位培养羊水细胞技术规范化流程。通过100例临床羊水标本与常规塑料瓶原位培养技术同步比对研究，实现临床转化。　　方法:　　1.载玻片清洁处理后，经APES∶丙酮稀释比例、浸泡时间，丙酮洗涤次数（设计了三因素三水平正交试验），晾干，环氧乙烷消毒包装。取27例羊水标本，采用不同处理方法的载玻片进行原位培养羊水细胞，通过评估细胞贴壁能力，筛选较佳的载玻片处理条件。　　2.自制载玻片与进口原装载玻片培养瓶同步培养10例羊水，分析细胞克隆数与有效分裂相数，比对两种载玻片贴壁能力。　　3.取40例羊水标本用自制载玻片培养，探索不同温度、湿度组合下染色体分散质量，分析羊水有核细胞数与细胞克隆数，细胞克隆数与有效分裂相数相关性。建立载玻片原位培养羊水细胞技术规范化流程。　　4.随机选择产前诊断患者100例，用自制载玻片法原位培养和塑料瓶培养法同步培养羊水细胞，进行临床检测比对试验，比对两种方法细胞贴壁成功率、细胞克隆数目、有效分裂相数及核型符合率，评价临床应用可行性。　　结果:　　1.自制原位培养的载玻片较佳制作工艺为APES∶丙酮稀释比例1∶25，处理10min，丙酮冲洗1次。　　2.自制载玻片上细胞克隆数的平均值为34.5±2.64，有效分裂相数平均值为15.8±1.14;进口Euroclone载玻片上细胞克隆数的平均值为37.6±6.11，有效分裂相数平均值为16.0±1.05。配对t检验分析经不同载玻片种类培养的细胞克隆数和有效分裂相数，细胞克隆数P=0.128(P＞0.05)，有效分裂相数P=0.555(P＞0.05)，无统计学差异。自制载玻片获得细胞克隆数和有效分裂相数能力不亚于进口载玻片，且价格低。　　3.温度(Temperature，T)、湿度（Humidity，H）综合影响染色体分散质量，以T=21，H=50;T=22，H=48;T=23，H=46; T=24，H=44组合，干燥时间200～300s为佳，可获得60％～65％的有效中期分裂相用于染色体核型分析。Pearson分析胎儿有核细胞数与贴壁克隆数相关性，R=0.344。贴壁克隆数在≤40个范围内与有效分裂相成正相关，克隆数＞40有效分裂相减少。　　4.自制载玻片与塑料瓶原位培养法比对试验结果显示，两者培养成功率均为100％。采用配对t检验分析，两个方法的细胞克隆数无显著差异(P=0.497)，有效分裂相数无显著差异(P=0.759)。100例羊水经两种方法同步培养，核型符合率达100％，检出正常核型95例，异常核型5例，染色体多态性改变3例，18三体1例，mos47，XX，+7[3]/46，XX[17]1例，自制载玻片法可以实现临床转化。　　结论:　　自制载玻片成功用于原位羊水培养，温度和湿度是影响染色体质量的主要因素，初步临床应用显示载玻片原位培养羊水细胞技术可以获得常规塑料瓶原位培养法同样效果，为高通量自动扫描捕获体系提供了基础技术平台，值得临床推广。