【摘 要】
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目的:子痫前期（Preeclampsia,PE）是一种妊娠期特有的并发症,病因具有异质性,尽管目前确切机理尚不清楚,但大多数研究学者认为PE可能与母胎界面炎症免疫过度激活,胎盘绒毛外滋养细胞侵袭功能受损,子宫螺旋动脉（Spiral Arterie,Sp A）重铸不良,母体血管内皮损伤以及遗传易感性等有关。RAB8A（Ras-related Protein Rab,RAB8A）是Rab家族中一种与R
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目的:子痫前期（Preeclampsia,PE）是一种妊娠期特有的并发症,病因具有异质性,尽管目前确切机理尚不清楚,但大多数研究学者认为PE可能与母胎界面炎症免疫过度激活,胎盘绒毛外滋养细胞侵袭功能受损,子宫螺旋动脉（Spiral Arterie,Sp A）重铸不良,母体血管内皮损伤以及遗传易感性等有关。RAB8A（Ras-related Protein Rab,RAB8A）是Rab家族中一种与Ras相关的小型GTP结合蛋白,能够调节多种细胞的炎症反应过程与迁移侵袭功能。至于RAB8A是否能够影响绒毛外滋养细胞相关炎症因子的表达和迁移侵袭功能尚无定论。本研究通过检测轻重度PE患者和正常妊娠对照组孕妇胎盘组织中RAB8A的表达水平,并采用脂多糖（LPS）刺激人绒毛外滋养细胞系HTR-8/SVneo,模拟炎症状态下的PE滋养细胞模型,探究RAB8A敲低前后该模型中滋养细胞炎症反应过程和迁移侵袭功能的变化,以期为阐明PE发病机理提供新的研究思考。方法:本研究收集轻度PE、重度PE以及正常妊娠对照组孕妇的胎盘组织标本。标本均来自2021年04月至2021年12月在中南大学湘雅二医院产科住院分娩的病人,利用免疫组化法（IHC）、Western blot法（WB）和RT-q PCR法检测RAB8A在胎盘组织中的定位和表达。随后采用250ng/m L LPS刺激人绒毛膜滋养层细胞株HTR-8/SVneo 24小时,模拟PE中滋养细胞的炎症状态,CCK-8法观察LPS处理后细胞的活性,ELISA检测LPS处理后细胞中炎症相关因子IL-6和IL-10的表达水平,WB和RT-q PCR测LPS处理组与对照组中RAB8A的表达差异,并通过免疫荧光法（IF）定位RAB8A在HTR-8/SVneo细胞中的表达情况。在使用si RNA干扰技术特异性敲低RAB8A后,同样方法检测LPS处理下的HTR-8/SVneo细胞中促炎细胞因子IL-6、抗炎细胞因子IL-10以及TLR4/NF-κB信号通路中TLR4、p-IκBα、IκBα、p-P65和P65因子表达水平的变化,同时通过划痕迁移和Transwell侵袭实验检测RAB8A敲低组与对照组HTR-8/SVneo细胞的迁移和侵袭能力,并用WB法和RT-q PCR法检测EMT相关因子Snail和E-cadherin的表达。使用SPSS 25.0软件分析数据,Graph Pad Prism 9.3.1软件绘制图片。结果:（1）轻重度PE组与对照组相比,分娩孕周、收缩压、舒张压以及24小时尿蛋白水平都存在差异,差异具有统计学意义（P＜0.05）。（2）免疫组化法检测轻度PE、重度PE和正常妊娠对照组孕妇胎盘中RAB8A的表达,发现RAB8A主要表达于滋养细胞的胞浆中,PE组RAB8A的表达强度高于对照组,且重度PE组表达强于轻度PE组。WB和RT-q PCR结果与上述结果相一致。（3）ELISA法检测到LPS刺激后的HTR-8/SVneo细胞中,促炎因子IL-6的表达水平升高、抗炎因子IL-10表达水平下降,同时RTq PCR和IF检测发现LPS处理后的HTR-8/SVneo细胞高表达RAB8A且主要位于胞浆中。（4）使用si RNA干扰技术特异性敲低HTR8/SVneo细胞中RAB8A的表达后,HTR-8/SVneo细胞中IL-6的表达下降而IL-10的表达增加,细胞凋亡比例减少,TLR4和NF-κB蛋白的活性明显受到抑制,其中p-IκBα、IκBα与p-P65表达水平均下降。（5）RAB8A敲低后的细胞迁移与侵袭能力增强,且E-cadherin蛋白水平下降而Snail蛋白水平升高。结论:RAB8A在PE胎盘组织中高表达,抑制RAB8A可能通过影响TLR4/NF-κB通路减轻LPS诱导的HTR-8/SVneo细胞炎症反应过程,同时敲低RAB8A可促进HTR-8/SVneo细胞的迁移侵袭功能和EMT过程。图22幅,表11个,参考文献55篇
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