姜黄素诱导人子宫内膜癌细胞(HEC-1-B)凋亡及其机制的研究

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背景子宫内膜癌(又称宫体癌)是女性生殖系较常见的恶性肿瘤之一,据统计,子宫内膜癌在欧美各国的患病率最高,在亚洲各国的患病率也有上升趋势。现在的治疗原则以手术和放疗为主,对于要求生育的病人或者是晚期复发的患者都需要辅助激素治疗、化学和免疫等治疗,然而化学治疗及激素治疗等药物治疗都存在着明显的禁忌症和毒副作用。故寻找安全、可靠、高效适用范围广的抗子宫内膜癌新药是研究的热点。目的观察姜黄素对人子宫内膜癌细胞(HEC-1-B)体外增殖及相关蛋白表达情况的影响,探讨姜黄素诱导人子宫内膜癌细胞凋亡的机制。方法将体外养殖的HEC-1-B细胞进行随机的抽样分组,分别为对照组、姜黄素Ⅰ、姜黄素Ⅱ、姜黄素Ⅲ和姜黄素Ⅳ组共五个小组。分别给与不同浓度的姜黄素(0,10,20,40,80)μmol/L培养48h和72h。采用MTT法1.检测人HEC-1-B细胞生长抑制率2.Hoechest33258荧光染色观察人 HEC-1-B田胞核形态的变化3.Western blot法检测相关蛋白的表达水平。用SPSS19.0统计学软件对上述检测结果做统计学分析。结果1.姜黄素对HEC-]-B增殖和凋亡的影响(1)MTT实验结果显示,将所有的小组进行观察对比分析,结果发现姜黄素每个小组吸光度都比对照小组低,(P<0.01),同时发现用药组的浓度在(10~80)μmol/L区间里对剂量具有很强的依赖性,这就反映了姜黄素有阻碍HEC-1-B细胞发展的作用。(2)Hoechest33258荧光染色观察显示,对照组细胞形态规则,而姜黄素各组细胞呈核碎裂、核固缩、荧光强度增强等凋亡特征。提示姜黄素可诱导人子宫内膜癌(HEC-1-B)细胞凋亡。2.姜黄素对HEG-1-B细胞相关蛋白表达的影响Western blot法结果显示,与对照组比较,不同浓度的姜黄素作用48h和72h之后,和对比组进行对照,结果HEC-1-B细胞的Survivin蛋白表达在这段时间里呈现下降的趋势,它是伴随着姜黄素浓度的增加和作用时间的上升而表达减少(P<0.01),而且具有时间-剂量依赖性。Western blot检测caspase-3蛋白,与对比组进行对照,不同浓度的姜黄素作用48h和72h后,HEC-1-B细胞的caspase-3蛋白表达水平均较对照组有不同程度的升高,并随姜黄素浓度及作用的时间的增加而递增,呈时间-剂量依赖性(P<0.01)。结论姜黄素对体外培养的人HEC-1-B细胞具有抑制作用,且这种抑制作用在一定浓度范围内呈时间-剂量依赖方式。一定条件下,可抑制人HEC-1-B细胞生长,且诱导其凋亡,其机制可能是下调HEC-1-B细胞survivin蛋白的表达,直接激活caspase-3蛋白而诱导人HEC-1-B细胞凋亡。
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