团头鲂繁殖相关基因SPATA4、GDF9和BMPRIB的克隆与表达研究

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Green__lucky
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SPATA4(Spermatogenesis associated4)、GDF9(Growth differentiation factor9)和BMPRIB(Bone morphogenic protein receptor IB)参与生殖细胞的发生及分化等过程,在动物繁殖中起着重要作用。本研究对团头鲂这三个基因进行了克隆和功能分析。首先采用RACE(Rapid amplification of cDNA ends)技术获得了SPATA4和GDF9基因的全长cDNA序列及BMPRIB的部分cDNA序列,其中SPATA4 cDNA全长序列为1076 bp,包括一个678 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),编码225个氨基酸;GDF9 cDNA全长序列2062 bp,包括一个1287 bp ORF,编码428个氨基酸;而BMPRIB包括3′末端共1164 bp的部分序列。此外,采用荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)方法,对团头鲂SPATA4、GDF9和BMPRIB基因的时空表达及GDF9、BMPRIB在不同卵巢时期中的表达进行分析。结果显示SPATA4基因在受精后1 h到4 h(受精后小时,hours post-fertilization,hpf)表达量逐渐升高,然后降低,而在28 hpf出现第二个波峰,然后又逐渐降低,到50 hpf达到最低,而在所检测的10个组织中其在精巢中的表达量最高;GDF9在1 hpf中表达量最高,在6 hpf表达量急剧下降,组织表达谱显示其在卵巢中的表达量最高,而在精巢、肝脏及肌肉等组织中几乎检测不到表达;BMPRIB基因在团头鲂早期发育过程中逐渐降低,直到50 hpf其表达量达到最低,在所检测的组织中脑、肝脏和脾脏中的表达量显著高于其它组织。荧光定量PCR检测GDF9和BMPRIB基因在卵巢不同时期表达结果显示, GDF9在卵巢由 VI期、II期和Ш期变化的过程中,表达量先增加后降低;而BMPRIB基因在这一变化过程中表达量增加后稍微降低。综上,SPATA4、 GDF9和BMPRIB在鱼类性腺的发育等可能起着重要作用。
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