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目的:探讨体外活化的自然杀伤T细胞(NKT)对大鼠角膜移植免疫排斥反应的防治作用。
材料与方法:无菌取Lewis大鼠外周血和脾脏中淋巴细胞，加入IL-7及IL-15，置中体外培养三周后，流式细胞仪分选出NKT细胞(浓度5×10<4>／ml)。取8只Fisher344大鼠为供体，16只Lewis大鼠为受体行穿透性角膜移植术。将受体大鼠随机分为治疗组和对照组，每组各8只。治疗组在手术结束时结膜下注射0.1ml上述浓度的NKT细胞，对照组注射相同体积生理盐水。术后观察记录植片的存活情况，术后第10天，每组取受体大鼠，取其眼球、外周血和脾脏，分别行组织病理学、免疫组织化学和流式细胞仪检测。
结果:Lewis大鼠外周血和脾脏中的淋巴细胞在RPMI1640培养基中培养三周后，经过流式细胞仪的筛选，选出NKT细胞共5×10<4>个。对照组角膜植片平均存活时间(mean survival time，MST)为(8.00±1.58)d，治疗组为(26.00±1.34)d，对照组的植片高度混浊水肿、明显增厚(约为正常角膜厚度的2～3倍)，大量新生血管长入植片，治疗组植片清亮、轻度水肿，未见新生血管长入。组织病理学检查可见对照组大鼠角膜植片重度水肿，角膜基质纤维板层排列紊乱，大量炎性细胞浸润，新生血管长入植片。而治疗组植片仅表现为轻度水肿，少量炎性细胞浸润。免疫组织化学染色可见对照组植片中大量CD4<+>和CD8<+>淋巴细胞浸润，治疗组中仅见少量CD4+和CD8+淋巴细胞浸润。流式细胞仪检查结果表明在治疗组大鼠脾脏中NKT细胞百分数为3.29﹪，对照组1.37﹪；外周血中治疗组NKT细胞百分数为0.26﹪，对照组为1.05﹪。
结论:经体外活化的NKT细胞结膜下注射可以明显延长大鼠角膜移植植片存活时产间，为角膜移植排斥反应的防治提供了新的思路和手段。