【摘 要】
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RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)能特异性抑制相应基因序列的mRNA表达。本研究试图研究小发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)载体介导抑制人卵巢癌细胞中血管内皮生长因子
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RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)能特异性抑制相应基因序列的mRNA表达。本研究试图研究小发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)载体介导抑制人卵巢癌细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因的表达和对卵巢癌细胞增殖的影响。采用脂质体介导的方法将抗VEGF小发夹状双链RNA真核基因表达载体转染到人卵巢癌细胞(HO-8910)中,用G418筛选获得阳性克隆。用Westernblot、RT-PCR检测VEGF基因在卵巢癌细胞中的表达;通过MTT及细胞周期分析观察其对卵巢癌细胞增殖的影响。研究结果表明,转染特异性小发夹RNA质粒表达载体的HO-8910细胞中VEGF表达量明显减少;细胞生长减慢,阻滞于G1期的增多,S期细胞减少。VEGF小发夹RNA质粒载体可显著抑制HO-8910细胞中的VEGF基因的表达,抑制卵巢癌细胞的增殖。这为肿瘤的基因治疗又探索出一条可行的治疗途径。另外构建了大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达载体,分别在两种菌中了表达人内皮抑素基因,为今后用双歧杆菌作为生理菌载体进行肿瘤的基因治疗奠定了基础。
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