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猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductiveand Respiratory Syndrom Virus,PRRSV)属于动脉炎病毒科、动脉炎病毒属,主要引起怀孕母猪流产、死胎、木乃伊胎、早产、产弱仔等繁殖障碍和仔猪呼吸困难、高死亡率及育肥猪呼吸道症状。PRRs具有传播快、流行范围广、高度传染性的特点。PRRSV基因组全长约15 kb,不分节,含8个开放性阅读框架(ORF)。国内外相关研究表明:PRRSV不同分离株的核苷酸序列存在明显差异,血清学实验和基因序列分析表明,PRRSV可划分为两种基因型毒株,即美洲株和欧洲株。目前我国所报道的分离株仅为美洲株。实时荧光RT-PCR技术是近年来发展起来的一项新技术,该方法具有快速、灵敏、准确、低污染等优点,在PRRSV的早期检测、预防控制、进出口检疫及基础研究中起到重要作用。1.美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立从GenBank上调取PRRSV美洲株的基因序列,用DNAStar软件进行同源性分析,分别选择同源性较高的ORF1基因、ORF6基因,设计U1和U6两套PCR引物和荧光探针,经反应优化建立U1和U6荧光RT-PcR用于检测美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。用10倍倍比稀释的质粒DNA、cDNA、RNA进行扩增以检测其灵敏度,同时对猪瘟(HCV)、猪伪狂犬(PRV)等7种病毒进行特异性检测。结果显示建立的U1和u6荧光RT-PCR可用于检测PRRSV,其灵敏度为10个拷贝的质粒DNA,与HCV等非PRRSV无交叉反应。建立的U1、U6荧光RT-PCR具有快速、灵敏、准确、低污染等优点,且能检测出现今流行的PRRSV变异毒株,可用于PRRSV样品的检测。2.欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立从GenBank上调取PRRSV欧洲株的基因序列,用DNAStar软件进行同源性分析,分别选择同源性较高的ORF1基因、ORF6基因,设计E1和E62套PCR引物和荧光探针,建立E1和E6荧光RT-PCR。经优化后用于PRRSV检测,并用10倍倍比稀释的质粒DNA、cDNA进行扩增以检测其灵敏度,同时对猪瘟(HCV)、猪伪狂犬(PRV)等7种病毒进行特异性检测。结果显示建立的E1和E6荧光RT-PCR检出PRRSV阳性,依次能检出616和216个拷贝的质粒DNA,而HCV等非PRRSV均为阴性。建立的E1、E6荧光RT-PCR可作为检测PRRSV的技术储备。