乙醇酸氧化酶(简称GLO)是光呼吸代谢的关键酶，在水稻基因组中至少有5条可能编码GLO蛋白的相似序列，分别在第三、四和第七染色体上。但目前对各个成员的具体功能尚不清楚。因此，探讨GLO基因家族中各成员的功能及其作用机理，可望发掘GLO新的生物学功能。本文采用RNAi和超表达技术，从转录水平调控GLO—2和GLO—5的表达，然后观测转基因植株的表型及生理生化变化。主要结果如下： 1.超表达GLO—5、特异干涉GLO—2和GLO—5转基因植株的构建 从水稻叶片和根中提取总RNA，根据GLO—2、GLO—5的基因序列设计特异引物，通过RT-PCR从水稻叶片的cDNA中扩增得到GLO—2干涉片段，从水稻根的cDNA中扩增得到GLO—5干涉和超表达片段。将两个干涉片段分别插入组成型pYLRNAi表达载体中，构建组成型干涉载体；GLO—5超表达片段插入组成型pOX超表达载体中，构建组成型超表达载体。转化水稻后经潮霉素筛选和PCR检测，初步确定目的片断已经整合到了水稻基因组中。 2.转基因后代的鉴定 三种转基因植株与野生型相比，表型上均无明显差异。通过半定量RT-PCR，Western杂交从转录、翻译水平鉴定了转基因植株，由此筛选出的GLO—2干涉植株在mRNA和蛋白水平均有不同程度下调；GLO—5干涉植株在蛋白水平下调明显，但在mRNA水平的变化却不明显；GLO—5超表达植株在mRNA水平上调比例显著提高，蛋白水平却无明显变化。 3.GLO—2和GLO—5在乙醇酸氧化酶活性中的作用 选取转录和翻译水平下调最为显著的材料测定其对应的GLO活性，结果表明：干涉GLO—2可导致叶片中的GLO活性最多下降40％左右，达到了极显著水平；干涉GLO—5可导致叶片中的GLO活性下调60％左右。因GLO—5的干涉片段的特异性高，可由此判断GLO—5参与了GLO的催化反应，但是否为必要成分或只起调控作用，有待进一步研究；尽管干涉GLO—2也引起了酶活性降低，但因其干涉片段的特异性不高，目前还很难判定GLO—2是否真的参与了GLO的酶活性的形成或调控。