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阿维菌素(avermectin)是由阿维链霉菌(Streptomyces avermitilis)产生的大环内酯类抗生素,是迄今为止发现的最有效的杀虫剂,杀螨剂和杀寄生虫剂。多杀菌素( spinosad )是由刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)产生的大环内酯类生物农药,是一种具有触杀及摄食毒性的广谱杀虫剂。本文对阿维菌素和多杀菌素的液相分析方法,阿维链霉菌原生质体的制备和再生,进行了系统性研究,阿维链霉菌与刺糖多孢菌基因组重排技术筛选高效低毒杀虫剂产生菌株进行了初步探索。建立了一种快速有效的多杀菌素和阿维菌素定量检测方法。采用外标法,以Agilent Zorbax XDB-C18(5μm, 4.6×250 mm)色谱柱,甲醇/乙腈/(含有0.05 %的乙酸铵)水= 45/45/10 (v/ v),作为流动相;流速1.0 mL/min,检测波长246 nm,进样量20μL,柱温30℃。发酵液预处理试验显示:在室温下,采用100 W的超声波处理15 min的超声处理方式,浸提2 h,最适浸提比例为:发酵液(全液):甲醇=1:4。试验首先对阿维链霉菌的原生质体制备和再生条件进行了研究。考察了种龄、甘氨酸浓度、溶菌酶浓度、溶菌酶作用时间及温度对制备阿维链霉菌原生质体的影响。同时对再生培养基进行了优化,使原生质体再生达到较佳的再生率和生长状态。实验结果现阿维链霉菌在阿维链霉菌在种子培养基YEME中培养40 h至对数生长期,以10%的接种量转接到50 mL 0.5%甘氨酸浓度的YEME培养基中继续培养18 h,收集菌丝体,经1 mg/mL溶菌酶在32℃的水浴条件下震荡水解20 min可获得大量原生质体。对阿维链霉菌与刺糖多孢菌运用基因重组技术进行育种,筛选高效低毒的重组菌株。通过对ZGD-2进行Co60诱变,原生质体紫外诱变等选育方式得到高产的pop-YUV阿维链霉菌菌株群。pop-YUV与pop-YDS作为出发的亲本菌株进行基因组重排,通过三轮基因组重排最后筛选到了5株菌株,其中GS-4、GS-1阿维菌素比出发菌株ZGD-2产量提高了107.8%,GSD-1多杀菌素产量比出发菌株pop-YDS提高24.4%,JSS-1、JSS-2不产阿维菌素也不产多杀菌,但仍具有杀虫活性。