论文部分内容阅读
目的:胃癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率呈逐年上升趋势。对于中晚期胃癌患者,化疗是十分重要的治疗方法。耐药是导致临床化疗失败的重要原因之一。缺氧环境是推动肿瘤耐药发生的一个关键因素,而HIF-1α作为缺氧诱导表达的重要转录因子之一,在这一过程起到十分重要的作用。ABC转运蛋白是一组位于细胞膜上的单向底物转运泵,研究发现其成员包括ABCB1(P-gp,MDR1)、ABCG2(BCRP)、ABCC1(MRP1)等,可将化疗药物泵出胞外,从而导致肿瘤耐药的发生。黄芩素是从植物黄芩根中分离出来的一种黄酮类单体成分,本课题组前期研究发现,黄芩素能逆转缺氧诱导的胃癌5-FU耐药,但其具体分子作用机制尚不十分清楚。本文旨在探讨HIF-1α及ABC转运蛋白在黄芩素逆转缺氧诱导的胃癌细胞5-FU耐药中所起的作用。方法:建立体外缺氧模型,采用CCK8法检测AGS细胞活力,观察黄芩素对AGS细胞的增殖抑制作用;验证缺氧诱导的AGS细胞5FU耐药性及黄芩素对这一过程的逆转作用;通过罗丹明染色验证黄芩素对缺氧条件下AGS细胞药物外排功能的影响。采用Q-PCR和Western-Blot检测黄芩素对AGS细胞HIF-1α、ABCB1(P-gp、MDR1)、ABCG2(BCRP)、ABCC1(MRP1)表达水平的影响。结果:黄芩素细胞毒性实验:根据量效曲线,10、20μM黄芩素在缺氧条件下,对AGS细胞没有细胞毒性(细胞活力>90%),可用于后续干预实验;黄芩素可逆转缺氧诱导的AGS细胞5-FU耐药;缺氧能使AGS细胞内罗丹明123蓄积减少,而黄芩素能逆转这一过程;黄芩素能抑制缺氧对HIF-1α、MDR1、ABCG2、MRP1的诱导表达。结论:通过HIF-1α通路下调药物外排功能,可能是黄芩素逆转缺氧诱导的胃癌5-FU耐药机制之一。