【摘 要】
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在本实验中，我们以野生型人类2型腺伴随病毒（Adeno-associated Virus Type 2，AAV-2）全基因组载体pSSV9，pSSV9-int-为基础，构建了AAV-2重组病毒载体pSSV9／P40-LacZ（+），pSSV9／P40-LacZ（-），pSSV9／MuLV-neosv和pSSV9／MuLV-neosv-IL2，以及表达载体pGEM-3zf／P40-LacZ。用重组载
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在本实验中，我们以野生型人类2型腺伴随病毒（Adeno-associated Virus Type 2，AAV-2）全基因组载体pSSV9，pSSV9-int-为基础，构建了AAV-2重组病毒载体pSSV9／P40-LacZ（+），pSSV9／P40-LacZ（-），pSSV9／MuLV-neosv和pSSV9／MuLV-neosv-IL2，以及表达载体pGEM-3zf／P40-LacZ。用重组载体质粒转染宿主细胞，以及重组病毒转导宿主细胞后，作了外源基因瞬式表达研究，探讨了该载体外源基因表达规律。对载体质粒转染和重组病毒感染的细胞进行了初步形态学观察研究，考察了该重组病毒载体在使用中的安全性。此外，我们以EBV载体pBV101为基础，构建了pBV101／AAVitr-，表达载体，并初步建立了EBV载体重组AAV包装细胞系统。 1、重组AAV载体的构建 我们以pSSV9（pSSV9-int-）AAV-2基因组为载体的基础，从两个Xba Ⅰ切去AAV的rep和Cap基因，替换以外源基因及其转录控制元件。插入AAVP40启动子和β-半乳糖苷酶基因LacZ（含SV40小T抗原及poly信号），形成pSSV9／P40-LacZ（+）和pSSV9／P40-LacZ（-）载体。并在克隆过
其他文献
C型利钠尿肽（C—type natriuretic peptide，CNP）是一种新发现的由22个氨基酸组成的内源性循环多肽，它由内皮细胞产生并以自分泌或旁分泌的方式广泛作用于全身各器官，因其结构与心房利钠尿肽（ANP）有共同之处，因而被认为是心房利钠尿肽家族中新的成员。 本文重点研究CNP在心血管系统中的调节作用及其可能的作用机制，对比观察CNP与ANP对心血管效应的异同点，并初步探讨其在
经典的“门脉递质学说”认为哺乳动物垂体前叶激素调控是通过体液途径实现的。近年来，鞠躬教授提出了“哺乳动物垂体前叶神经—体液双重调节假说”，这是对“门脉递质学说”的重要修正，该假说的提出有丰富的实验依据，其中犬垂体前叶肽能神经纤维与腺细胞突触的发现，为该假说的提出奠定了坚实的形态学基础。大鼠和犬有着完全不同的生活习性和生存条件，本实验应用免疫组化和免疫电镜技术观察了大鼠垂体前叶P物质（SP）免疫反应
本论文共包括三部分： 一、内脏和躯体初级传入冲动在猫骶髓后连合核的汇聚 用玻璃微电极细胞外记录的方法，观察了在电刺激猫盆神经和胫神经或机械性刺激会阴时，骶髓后连合核（Sacral dorsal commissural nucleus，SDCN）神经元自发放电频率的变化。共记录了80个单位放电神经元，其中13个为无关单位。电反应类型有3种：长潜伏期长串反应，短潜伏期长串反应，抑制性反应。
癫痫多发、难治、危害性大，复杂部分性癫痫发作为其典型代表之一，深入探讨癫痫发作可能的细胞学基础与分子机制，已成为最终认识和解决癫痫问题的关键所在。本研究采用公认的复杂部分性癫痫发作模型——大鼠红藻氨酸诱导性癫痫发作，以组成性一氧化氮合酶抑制剂L-硝基精氨酸及一组小剂量的L-精氨酸予以干预，用多种定性、定量或半定量方法，从行为学评估（制备录像资料）、形态学观察（免疫组化与Nissl复染）以及生物化学
广为人知的是哺乳动物垂体前叶无支配腺运动的神经，仅有少数支配血管的自主神经。下丘脑对垂体前叶的调节是经门脉介导的。但是，自从本实验室在包括大鼠在内的一些哺乳动物垂体前叶发现相当多数量与腺细胞关系密切的肽能神经纤维后，又证实这些神经纤维及GABA能神经纤维与各种腺细胞间形成突触联系。当刺激这些神经纤维时，可改变腺细胞的分泌活动。还发现这些神经纤维对体内激素水平的变化反应活跃。基于这些实验依据，鞠躬教
众所周知，存在于脑干下行抑制系统中的5—羟色胺（5-HT）和去甲肾上腺素（NA）具有镇痛作用。然而，5-HT和NA产生抑制性效应的机理尚不清楚。许多证据表明，作为脊髓内主要的抑制性递质的甘氨酸（glycine，Gly），对脊髓伤害性传导起重要调节作用。Gly与受体结合后，作用于Gly门控氯离子通道，增加氯离子的电导，使细胞膜发生超极化。最近有证据表明，通过细胞内第二信使激活蛋白激酶介导的Gly受体
三叉神经脊束核尾侧亚核（Vc）是感受面口部伤害性刺激信息并向上位脑结构投射的重要中继站，电刺激中缝大核对三叉初级传入伤害性刺激信息有明显的抑制作用，在调节过程中不仅有经典递质及肽类递质的参与，而且有氨基酸类递质的参与，生理学方面的工作已有很多证据支持上述观点。在形态学方面，关于初级传入和下行投射与Vc的神经元之间的突触联系仅见一些零星的资料，且主要是光镜水平的工作，而氨基酸类递质及其受体在Vc内的
近年来，应用灵敏的免疫组化等方法，本研究室在若干包括人在内的哺乳动物脑下垂体前叶发现了数量较多的SP、CGRP、galanin等肽能神经纤维；它们与腺细胞关系密切，并形成典型的突触联系，从形态学方面证明了这些肽能神经纤维的腺运动性质。这些肽能神经纤维中至少有部分起源于下丘脑；而且这些纤维可以对机体的内分泌状态的变化作出积极的反应。新近离体实验表明电场刺激垂体前叶神经纤维可明显影响前叶激素的分泌。从
目的：以大体，细胞及分子三个不同水平，从应激过程中起重要作用的垂体细胞入手，探讨营养素锌对冷应激大鼠ACTH分泌的影响及其机制，为进一步研究锌在冷应激过程中的作用提供实验依据。 方法：①将雄性SD大鼠36只，随机分为6组，1、3、5组给予正常饲料（含锌39.2±4.5ppm），饮自来水，2、4、6组给予正常饲料，自来水中加ZnCl2（25mg／L），5d后，在一日内，8时，16时，24时分别
胎肝是一种正处于生长发育阶段的组织，能分泌多种促进细胞生长的因子，特别是近几年来广泛应用的”肝细胞生长素”就是直接从胎肝组织提取的一种混合蛋白多肽成份。但是，由于蛋白纯化方面的原因，以及成分的非单一性，至今也未克隆出它的基因。这也是传统从蛋白到基因研究方法中的一个主要问题。有鉴于此，许多研究人员致力于直接寻找新基因，并发展了一些相应的新技术。其中利用细胞间基因表达差异来筛选新基因的方法是近来受到热