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目的:骨关节炎(Osteoarthritis,OA),又名,骨关节病,是一种表现为关节软骨退化和关节边缘新骨生成,即骨赘生成的关节疾病。膝关节OA在OA中最为常见,是引起膝关节痛的主要原因之一,并且发病率随年龄而增加,是影响老年人运动及慢性残疾的首要原因,因此寻找一种安全、高效的治疗方法,已成为医学研究者关注的热点。本课题以膝关节注射MIA形成的膝关节OA的大鼠模型为研究对象,从而探讨膝关节OA动物模型膝关节组织结构的改变及艾灸对其影响,在分子水平上研究艾:灸对膝关节OA大鼠膝关节转化生长因子β1(Transforming Growth Factor-β1,TGF-β1)、转化生长因子β3(Transforming Growth Factot-β3,TGF-β3)及蛋白多糖(Proteoglycan,PTG)表达的影响及其作用机理,从而评价艾灸干预膝关节OA发生发展的可行性,为临床治疗提供实验依据。方法:选用2月龄雄性Wistar大鼠39只,体重175-200g,随机分为正常组、模型组、艾灸组,每组13只。将除正常组以外的2组大鼠用10%水合氯醛按4ml/kg的标准腹腔注射麻醉,在无菌条件下,穿过髌下韧带,予以膝关节内注射,右膝注射MIA,按1mgMIA:50μl生理盐水标准稀释,左膝注射50μl生理盐水,标准饲养28天后将各组大鼠各随机处死一只,取其关节软骨做苏木精一伊红染色,光镜观察关节软骨组织结构变化是否符合骨性关节炎变化,以确定造模成功。28天后开始治疗,正常组、造模组不做任何处理,开始进行艾灸治疗,取右侧膝眼,采用温和灸,20分钟/次,距离皮肤2~3cm,1次/日,10天为1疗程,疗程间休息1天,共治疗3个疗程。治疗时以5%异氟烷(与空气混合)轻度吸入性麻醉。末次治疗后禁食24小时后处死,取整个膝关节。将其中一半样本用5%甲酸脱钙,常规石蜡包埋,7μm连续切片,贴于APES防脱片胶处理的载玻片备染。另一半样本置于RPMI medium/0.1%BSA,温箱中培养10小时。采用免疫组织化学方法(ABC法)检测TGF-β1和TGF-β3;酶联免疫法检测TGF-β1、TGF-β3的含量;组织化学染色法测定骨赘大小及软骨中PTG的含量。结果:1.膝关节注射MIA可形成典型的实验性膝关节OA大鼠模型,造模大鼠的膝关节软骨骨赘面积与正常大鼠相比,明显增多,有非常显著性差异(P<0.01);2.实验性膝关节OA大鼠膝关节软骨中PTG的含量较正常组降低。经统计学处理,有非常显著性差异(P<0.01);3.实验性膝关节OA大鼠膝关节软骨中TGF-β1、TGF-β3的表达及含量较正常组明显升高。造模组大鼠的TGF-β1含量,与正常组相比,有显著性差异(P<0.05);造模组大鼠的TGF-β3含量,与正常组相比,有非常显著性差异(P<0.01);4.艾灸“膝眼”穴治疗可明显降低实验性膝关节OA大鼠膝关节软骨骨赘面积,艾灸治疗组膝关节软骨骨赘面积与造模组比较,有非常显著性差异(P<0.01)。5.艾灸“膝眼”穴治疗可提高实验性膝关节OA大鼠膝关节软骨中PTG的含量,与造模组比较,有非常显著性差异(P<0.01)。6.艾灸“膝眼”穴治疗可明显降低实验性膝关节OA大鼠膝关节软骨TGF-β1、TGF-β3的表达含量。经统计学处理,艾灸治疗组TGF-β1含量与造模组比较,有显著差异(P<0.05);艾灸治疗组TGF-β3与造模组相比,有非常显著性差异(P<0.01);结论:艾灸“膝眼”穴可延缓或改善膝关节OA的软骨退变,减少或抑制骨赘的形成,提高了膝关节软骨中的PTG含量,其作用机理可能是艾灸治疗可下调膝关节OA软骨中过高的TGF-β1、TGF-β3水平,促进了PTG在膝关节软骨细胞中的合成或抑制了PTG的分解,从而减少了骨赘的形成,达到治疗膝关节OA的目的。