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目的:通过体外培养大鼠C6胶质瘤细胞,观察益气祛瘀解毒方含药血清联合替莫唑胺（Temozolomide,TMZ）干预下细胞生长、增殖、迁移、凋亡和周期等变化,运用免疫蛋白印迹法（Western Blot,WB）测定PIK3CA,AKT,p-PI3KCA、p-AKT、PD-L1蛋白的表达,探析益气祛瘀解毒方含药血清联合TMZ对胶质瘤PI3K/AKT信号通路的干预机制,为脑胶质瘤术后的中医药治疗提供依据。方法:采用随机数字表法将30只8周龄的SPF级雄性SD大鼠分为益气祛瘀解毒方组和空白血清组,前者给予中药浓缩水煎剂0.12ml/kg灌胃,后者给予等量生理盐水,1次/日,连续7天,末次灌胃后腹主动脉取血,离心收集血清,过滤、混合、分装、冻存。用超高效液相色谱-三重四级杆-飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS/MS）法鉴定含药血清是否含药后进行细胞增殖抑制（MTT）实验判断药物疗效,使用空白对照组、TMZ组、含药血清组、联合组（含药血清+TMZ）干预大鼠C6胶质瘤细胞,进行细胞增殖抑制、集落形成、划痕愈合、凋亡、周期、DAPI染色实验观察益气祛瘀解毒方含药血清联合TMZ对细胞生长、增殖、迁移、凋亡和周期等变化。Western Blot检测PIK3CA,AKT,p-PI3KCA、p-AKT、PD-L1蛋白的表达情况。收集整理实验数据,进行分类汇总分析。结果:（1）UPLC-Q-TOF-MS/MS法结果显示,方药正离子流图峰高较高、离子流较密集,含药血清正离子流图密集度相似,但平均峰高降低。对比数据库后方药共含有3854种离子碎片,含药血清共含有3853种离子碎片,说明方药经大鼠代谢入血后,血清中仍然含药。（2）增殖抑制实验表明相同浓度含药血清比空白血清细胞抑制作用强且呈剂量依赖性;与空白对照组相比,10%含药血清联合20μg/ml的TMZ联用指数最低,协同效应最强（p＜0.01）;说明单独应用益气祛瘀解毒方含药血清可以抑制细胞增殖,但低浓度抑制效果不如TMZ,10%益气祛瘀解毒方含药血清联合20μg/ml的TMZ能显著抑制细胞增殖,增加TMZ敏感性。（3）集落形成实验结果显示,TMZ组生长抑制效果优于空白对照和含药血清组,联合组优于TMZ组,说明单独使用含药血清的生长抑制效果不佳,联合TMZ可协同增效（p＜0.01）;（4）划痕愈合实验:与空白对照组相比,含药血清组和联合组的细胞迁移率均降低,6h迁移率TMZ组＞空白对照组＞联合组＞含药血清组,12h迁移率TMZ组＞空白对照组＞含药血清组＞联合组,说明TMZ有促进细胞迁移趋势而含药血清有抑制细胞迁移趋势,含药血清能减轻TMZ促进细胞迁移的毒副作用,且在12h时含药血清联合TMZ的细胞迁移抑制效果最明显,差异无统计学意义（P＞0.05）;（5）DAPI染色显示按照空白对照组、TMZ组、含药血清组和联合组顺序,细胞数量依次减少,细胞核固缩、碎裂依次增多,细胞核荧光染色强度依次增强,细胞凋亡率增加;（6）凋亡实验可见,各组药物干预后细胞存活率、各期凋亡率均有一定程度变化且以晚期凋亡为主,与空白对照组相比,联合组总凋亡率差异具有显著性（p＜0.05）;（7）细胞周期结果显示,含药血清组及联合组G1期细胞数逐渐减少,S期逐渐增加,其中联合组G1、S期较空白对照组和TMZ组均改变显著（p＜0.01）;（8）WB结果表明,各组药物干预后较空白对照组PIK3CA,AKT,p-PI3KCA、p-AKT、PD-L1蛋白均有下调,其中联合组p-PI3KCA、p-AKT、PD-L1下调明显（p＜0.05）。结论:益气祛瘀解毒方含药血清联合TMZ能通过降低大鼠C6胶质瘤细胞中p-PI3KCA、p-AKT、PD-L1的表达,从而抑制PI3K/AKT信号通路的激活,降低免疫逃逸进而诱导免疫应答,能够抑制C6细胞生长、增殖和迁移,促进细胞凋亡,将细胞周期阻滞于S期,抑制胶质瘤细胞恶性生物学表型,益气祛瘀解毒方含药血清能协同TMZ减毒增效,为益气祛瘀解毒方参与胶质瘤术后治疗,增加TMZ化疗敏感性和延缓复发提供依据。