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一、研究背景近年来有研究发现,除环境与生活方式等外界因素外,个体的遗传背景是结核病发生的另一种影响因素。目前已经发现多个基因位点与结核病发病密切相关,其中维生素D受体(vitaminDreceptor,VDR)是其中主要的候选基因之一。迄今为止,已发现不少于25个VDR基因多态性位点,其中研究较多的包括ApaⅠ、Bsm Ⅰ、FokⅠ、TaqⅠ四个位点,是调节骨代谢的主要位点。此外,许多VDR目的基因是通过一个保守的内分泌途径来调节维生素D的代谢,所以VDR蛋白分子或其功能上的任何变化都可能影响维生素D的代谢,从而影响骨关节结核的易感性。目前有关VDR基因多态性对于肺结核易感性的研究在国内外已有较多报道,但VDR基因多态性对骨关节结核易感性是否有影响,国内外相关性研究较少。至今尚无针对广东地区汉族人群维生素D受体基因多态性与骨关节结核易感性的研究。同时,作为VDR的配体,维生素D的血清浓度是否影响骨关节结核的易感性,目前尚不明确。二、研究目的1、通过检测骨关节结核病人与非骨关节结核者的维生素D受体基因多态性,探讨维生素D受体基因多态性与中国广东地区汉族人群骨关节结核易感性的关系。2、通过检测骨关节结核病人与非骨关节结核者的维生素D血清浓度,探讨维生素D血清浓度与中国广东地区汉族人群骨关节结核易感性的相关性。三、材料与方法1、研究对象与分组1.1结核组收集2015年5月至2016年12月南方医院、广州市胸科医院、广州华侨医院、广州军区总医院、广州中医药大学第一附属医院、河源市中医院收治的广东地区汉族罹患骨关节结核患者133例,男85例,女48例,年龄8-84岁,平均45.5岁。术前血液化验指标及放射影像学符合骨关节结核的诊断,术后病灶病理切片证实结核病感染征象,病灶组织分离培养结核分枝杆菌阳性或抗酸染色阳性,纳入结核组。1.2对照组2015年5月至2016年12月,选取与病例组无血缘关系的130例广东地区汉族志愿者作为对照。入选者均来自河源市中医院健康查体者;年龄20-76岁,平均43.4岁;其中男性68例,女性62例。均经问病史查体及胸片检查均排除肺结核及骨关节结核病史。2、样本采集两组研究对象在次日凌晨空腹抽取外周静脉血2ml,取1ml置于EDTA抗凝管中,静置在室温(20-25℃C)1小时后,2000转/分离心10分钟,得到的血清置于-80℃C冰箱冻存待检。剩余1ml,提取VDR全基因组DNA,置于-80℃C冰箱待检。3、维生素 D 多态位点 rs7975232(aⅠ)、rs1544410(Bsm Ⅰ)、rs2228570(FokⅠ)、rs731236(TaqⅠ)的检测应用SNaPshot技术检测两组对象维生素D受体基因各位点多态性,并进行VDR基因分型。4、血清维生素D的测定检测血清25-羟维生素D(250HD)是目前评价血清维生素D状态的最佳方法。应用双抗体夹心法(Elisa)测定标本中人25-羟维生素D水平,评价人体血清维生素D的浓度。5、数据分析采用SPSS软件(version 20.0;SPSS,Chicago,IL)进行统计学分析。计量资料以均数±标准差(x±s)表示(本研究的计量资料符合正态分布),计数资料用频数表示。采用卡方检验比较分类变量及计数资料;采用独立样本t检验比较连续变量。双侧P<0.05表示差异有统计学意义。四、结果1、Hardy-Weinberg遗传平衡检验根据Hardy-Weinberg遗传平衡定律计算对照组各基因型的预期值。经卡方检验各观察值与期望值之间分布近似,P值均>0.05,提示对照组样本来自于遗传平衡群体,有较好代表性。2、一般情况比较两组研究对象在年龄、性别构成方面的差异无统计学意义(P>0.05)。3、两组VDR基因型分布频率比较维生素D受体基因Apa Ⅰ位点的基因型分别为野生型AA和突变型Aa、aa,三种基因型在结核组和对照组中的分布差异有统计学意义(P<0.05);其中结核组中AA基因型的分布频率为49.9%,显著高于对照组(33.1%),与Aa基因型相比,罹患骨关节结核风险更大(OR=1.924,P＜0.05,95%CI为1.141～3.245)。维生素D受体基因Bsm Ⅰ位点的基因型分别为野生型BB和突变型Bb、bb,但在结核组和对照组内未能测到突变型bb。两个基因型在两组内的分布差异无统计学意义(P>0.05)。维生素D受体基因Fok Ⅰ位点的基因型分别为野生型FF和突变型Ff、f、,三种基因型在两组中的分布差异有统计学意义(P<0.05);其中结核组中ff基因型的分布频率为22.6%,显著低于对照组36.2%,与FF、Ff基因型相比,罹患骨关节结核风险更小(OR=0.458,P<0.05,95%CI 为 0.235～0.893;OR=0.549,P<0.05,95%CI 为 0.306～0.982)。维生素D受体基因Taq Ⅰ位点的基因型分别为野生型TT和突变型Tt、tt,但在结核组和对照组内未能测到突变型tt。两个基因型在两组内的分布差异无统计学意义(P>0.05)。4、两组血清维生素D浓度比较结核组与正常对照组的250HD浓度均数分别为25.72±6.21、27.27±5.53ng/mL,两组浓度的差异有统计学意义(P<0.05)。五、结论1、维生素D受体基因多态性位点rs7975232(ApaⅠ)、rs2228570(FokⅠ)的基因型在两组间分布频率存在差异,提示其多态性可能与广东地区汉族人群骨关节结核相关;其中ApaⅠ-AA基因型可能是骨关节结核的易感基因型,而Fok Ⅰ-ff基因型可能是骨关节结核的保护基因型。rs1544410(Bsm Ⅰ)、rs731236(TaqⅠ)基因型分布在两组间不存在差异,提示其多态性可能与广东地区汉族人群骨关节结核无相关性。2、结核组患者血清25-羟维生素D浓度较正常组低,提示血清25-羟维生素D浓度可能与广东地区汉族人群骨关节结核发病相关。