心血管疾病的发病机制复杂且常伴随各种血栓和并发症,血栓可以诱发脑血栓或血管栓塞等栓塞性并发症最终导致病人死亡。故血栓的预防和治疗成为降低人们死亡率和致残率的关键。由于血栓的情况比较复杂,如动脉血栓常合并静脉血栓或胸腔内血栓,临床一般习惯联合用药。抗凝和抗血栓药物因其分别有抗凝血作用和抗血小板聚集作用而被广泛用于各种血管栓塞性和动脉粥样硬化疾病中。由于这两类药物在抗栓环节可能存在着互补作用,两类药物联用治疗可能是有益的。华法林和阿司匹林分别是抗凝剂的经典药物和临床常用的抗血小板聚集药物,这两种药物能否联合使用一直受到广泛的关注。在国外,临床普遍使用小剂量阿司匹林和华法林联合治疗较为复杂的心血管疾病如急性冠脉综合征,在北美超过100万患者同时接受阿司匹林和华法林的治疗。由于临床上各种血栓症状的多样性和复杂性以及用药的安全性等问题,关于华法林和阿司匹林联合使用的疗效和安全性评价在学术界和临床上存在很大的争议。因为联合疗法的出血风险会显著增高,医生常困惑于是否应该以及在何种情况下对这两种药进行联用。课题组前期致力于研究阿司匹林和华法林联合使用时在比格犬或SD大鼠体内的药动学和药效学参数变化,其结果表明阿司匹林的存在会使华法林的药动学暴露量增加(AUC、Cmax),凝血酶原时间(PT)增加。细胞色素P450酶系(CYP450)在人体内参与多种内源性和外源性物质的氧化代谢,是药物I相代谢过程中一种重要的酶。CYP450酶家族中的CYP2E1和CYP3A4参与了约90%的临床使用药物的代谢。临床治疗中经常会合并用药,但是两种药物联合使用会产生相互作用,疗效并不稳定。许多外源性物质可以通过诱导或抑制CYP450酶的活性,从而引起药物产生相互作用,导致药物药理或毒理活性改变。因此研究外源性物质是否存在调控细胞色素P450酶系的作用是阐述临床用药相互作用的一种有效评价手段。入肝脏重组微粒体研究表明华法林的其中一种代谢酶为CYP3A4,故当与阿司匹林联合治疗时,阿司匹林可能会通过影响CYP3A4酶来调控华法林的药代学和药理学作用。本文章研究华法林和阿司匹林联用对CYP3A酶活性、蛋白表达水平及mRNA表达水平的影响,阐明华法林和阿司匹林相互作用的影响。研究的主要内容概括如下：1.阿司匹林和华法林联用对大鼠CYP3A酶活性的影响根据随机对照原则,将32只雄性SD大鼠随机分为4组：第一组为对照组,每天定时灌胃给予一次CMC-Na(0.1mol/L)溶液,连续给药14天；阿司匹林组,每天定时灌胃给予一次阿司匹林(10mg/Kg)溶液,连续给药14天；华法林组,每天定时灌胃给予一次华法林(0.8mg/Kg)溶液,连续给药14天；阿司匹林和华法林联用组,同上述方法,同时给予阿司匹林和华法林溶液。在最后一次给药后,所有大鼠禁食24h再脱臼处死,制备肝微粒体。先检测各组肝微粒体的蛋白含量,再将各组肝微粒体配制成终浓度为0.4mg/ml的反应体系进行孵育反应。以丙酸睾酮作为探针底物,建立HPLC分析方法检测大鼠肝微粒体活性,通过计算各组份6β-羟基睾酮的生成率来判断各组大鼠肝微粒体的活性差异。结果表明阿司匹林和华法林联用可以抑制肝微粒体活性(P<0.05)。2.阿司匹林和华法林联合使用对大鼠CYP3A酶的蛋白表达的影响使用western blot法来检测四组肝微粒体CYP3A酶蛋白的表达量。与对照组、阿司匹林组相比,阿司匹林和华法林联用组大鼠CYP3A的蛋白表达量明显降低,且统计学差异明显(P<0.01)；而与华法林组相比,阿司匹林和华法林联用组大鼠CYP3A蛋白表达量降低,有统计学差异(P<0.05)。阿司匹林组和对照组之间CYP3A的蛋白表达量无明显统计学差异。华法林组与对照组、阿司匹林组相比,有统计学差异(P<0.01)3.阿司匹林和华法林联合使用对大鼠CYP3A的mRNA表达的影响使用qRT-PCR检测各组大鼠CYP3A酶的mRNA表达量是否改变,结果表明与其他组相比,只有阿司匹林和华法林联用组大鼠CYP3A酶的mRNA表达量下降。4.免疫组化法将事先预留好的用4%甲醛固定的肝组织制成石蜡切片后染色。结果表明阿司匹林和华法林联用组酶表达量明显下降。结论：阿司匹林和华法林联用通过抑制CYP3A酶的mRNA表达,降低了CYP3A酶的蛋白表达,从而使CYP3A酶的活性降低。