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玻璃酸酶是一类主要分解透明质酸的糖苷酶。在自然界中广泛存在，将其用于眼科、外科及牙科等手术麻醉时，可加速局部麻醉剂的扩散；对于手术及创伤后局部水肿或血肿有消散的功能。本研究以牛睾丸为原料，采用单因素试验和Plackett-Burman试验筛选对玻璃酸酶提取影响显著的因素；在此基础上，采用响应面试验对显著因素进行优化，获得玻璃酸酶提取的最佳参数；通过对填料、盐浓度、洗脱方式及流速等参数进行筛选，获得最佳纯化工艺；对纯化后的酶采用紫外全波长扫描和SDS-PAGE对酶及分子量进行初步鉴定；最后对酶进行部分特性的研究。本试验提高了牛副产物的利用率，且为牛玻璃酸酶的深入研究提供理论依据及参考。主要研究结果如下：1.牛玻璃酸酶提取：采用单因素试验、Plackett-Burman试验及响应面试验对玻璃酸酶提取工艺条件进行研究，试验结果表明：浸提缓冲液pH值、NaCl浓度、料液比三个因素对提取工艺影响显著，且各因素对酶活力影响程度为：浸提缓冲液pH值>NaCl浓度>料液比；最佳提取条件为：浸提缓冲液pH值5.71、NaCl浓度0.14mol/L、料液比1:1.74。在此条件下，牛睾丸玻璃酸酶的比活力为118mU/mg，提取率为0.938%。2.牛玻璃酸酶纯化：采用离子交换层析法初步纯化玻璃酸酶，最佳工艺条件为：选择SP Sepharose Fast Flow层析柱，采用分步洗脱方式，NaCl浓度为0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mol/L。在此条件下，玻璃酸酶的纯化倍数为7.53，回收率为67.87%。采用凝胶过滤层析法对玻璃酸酶进一步纯化，最佳工艺条件为：选择Sephacryl S-100层析柱，以0.5mL/min的流速收集玻璃酸酶，其纯化倍数为26.11，回收率为12.93%。3.牛玻璃酸酶鉴定：采用紫外波长扫描，对N-乙酰-D-氨基葡萄糖标品及酶与底物的生成物进行扫描，结果显示：两条曲线基本吻合，均在544nm和585nm波长左右出现两个最高值点，故确定纯化出的酶是牛睾丸玻璃酸酶。采用SDS-PAGE对酶进行分子量的初步鉴定，试验结果显示出两条接近的条带，分子量分别约为60kDa和67kDa。4.牛玻璃酸酶酶学特性：对酶的部分酶学特性进行研究，试验结果表明：最适反应温度和pH值分别为40℃、4.5，酶在20~40℃及pH值为4~5的范围内具有较好的稳定性；NaCl浓度为0.3mol/L时，酶活力相对较高；金属离子Fe3+、Ca2+、Mn2+、Mg2+、Zn2+、Al3+、K+对酶均有不同程度的抑制作用；该酶的Km值为0.106mg/mL。