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目的多个研究已经证实lncRNA HOTAIR通过与miRNA相互作用调控靶基因的表达,进而参与胃癌的发生发展。而miR-1277-5p在胃癌发生发展中的作用尚不清楚,因此,本实验以miR-1277-5p为中心,研究miR-1277-5p在胃癌发生发展中的作用及其机制。方法1.通过生物信息学的方法筛选出胃癌组织中高表达的lncRNA和基因,并采用Gene Ontology(GO)、Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)pathway、String分析和Kaplan Meier plotter法分别筛选出一个lncRNA和靶基因。预测并筛选出的lncRNA和靶基因的靶向miRNA并筛选出其共同靶向miR-1277-5p,通过过表达和干扰上游lncRNA表达,采用实时定量PCR法检测miR-1277-5p表达水平的变化,进一步验证上游lncRNA和miR-1277-5p的调控关系。2.为了检测lncRNA/miR-1277-5p/靶基因调控轴对胃癌发生发展的影响,采用Western blot和实时定量PCR法探究靶基因在胃癌细胞和组织中的表达量,并筛选出两种高表达靶基因的细胞株用于后续实验。进一步通过CCK-8法检测靶基因对胃癌细胞增殖的影响。3.通过瞬时转染构建miR-1277-5p过表达和干扰胃癌细胞模型,通过MTT法、划痕实验和Transwell细胞迁移和侵袭实验检测miR-1277-5p对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和运动等生物学行为的影响。4.通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-1277-5p与上游lncRNA、miR-1277-5p与目的基因的相互作用关系。采用Western blot和实时定量PCR法检测胃癌细胞过表达和干扰miR-1277-5p与上游lncRNA后靶基因的表达水平变化进一步验证lncRNA/miR-1277-5p/靶基因调控轴的相互作用关系。通过瞬时转染构建上游lncRNA过表达和干扰胃癌模型,通过MTT法、划痕实验和Transwell细胞迁移和侵袭实验检测上游lncRNA对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和运动等生物学行为的影响。结果1.生物信息学结果显示,lncRNA HOTAIR和COL5A1在胃癌组织中高表达,且高表达lncRNA HOTAIR和COL5A1与胃癌患者的总生存期呈负相关。miR-1277-5p作为lncRNA HOTAIR和COL5A1的共同靶向miRNA,其表达与lncRNA HOTAIR的表达呈负相关,由此构建出胃癌中lncRNA HOTAIR/miR-1277-5p/COL5A1靶向调控轴。2.Western blot和实时定量PCR结果表明,相对于正常人胃黏膜细胞(GES-1),胃癌细胞(SGC-7901、MGC-803、AGS、HGC-27和MKN-45)中COL5A1处于高表达状态,且COL5A1在胃癌组织中的表达高于癌旁组织。干扰COL5A1后,胃癌细胞的增殖能力降低。3.体外实验表明,在胃癌细胞(AGS和HGC27)中,过表达miR-1277-5p能够显著抑制胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭和运动等生物学行为,而干扰miR-1277-5p产生相反的结果。4.双荧光素酶报告基因实验表明,miR-1277-5p与lncRNA HOTAIR、miR-1277-5p与COL5A1均能够靶向结合,且过表达和干扰lncRNA HOTAIR能够分别促进和抑制COL5A1的表达,而过表达和干扰miR-1277-5p能够分别抑制和促进COL5A1的表达。过表达胃癌细胞(AGS和HGC27)中lncRNA HOTAIR能够显著促进胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭和运动等生物学行为,而干扰lncRNA HOTAIR产生相反的结果。结论1.miR-1277-5p负性调控胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭和运动等生物学行为。2.COL5A1是miR-1277-5p的靶基因,lncRNA HOTAIR作为miR-1277-5p的上游lncRNA,lncRNA HOTAIR通过与miR-1277-5p结合并抑制后者的表达,促进COL5A1的表达,进而增强胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭和运动等能力。3.lncRNA HOTAIR/miR-1277-5p/COL5A1靶向调控轴参与胃癌的发生发展。