被修饰的PLGA介导神经干细胞和雪旺细胞联合移植修复脊髓损伤

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目的本实验的目的是观察神经干细胞和雪旺细胞以经修饰的PLGA为支架构成的分子器件联合移植入脊髓损伤区促进神经干细胞定向生长,使脊髓损伤的修复成为现实,为临床治疗脊髓损伤提供实验依据,可能成为治疗脊髓损伤的一种新方法。同时探讨PLGA分子器件作为神经组织工程材料的可行性。方法疏水蛋白HFBI修饰聚乳酸-乙醇酸[Poly(D,L-lactide-co-glycolicacid),PLGA]表面后,通过微印迹技术将胎牛血清印迹在被修饰的PLGA上,形成条带状。神经干细胞经5—溴脱氧尿嘧啶标记后,将神经干细胞和雪旺细胞种植在被修饰的PLGA上观察细胞贴附和生长。40只Wistar大鼠建立大鼠脊髓半横断动物模型并随机分为4组:对照组(被修饰的PLGA),SCs移植组(雪旺细胞+被修饰的PLGA),NSCs移植组(神经干细胞+被修饰的PLGA),联合细胞移植组(神经干细胞+雪旺细胞+被修饰的PLGA)。将种植有神经干细胞和雪旺细胞的被修饰的PLGA卷曲形成三维支架移植于脊髓损伤区。8周后进行BBB评分,病理组织学,免疫组织化学,免疫荧光,HRP逆行示踪,电生理检测,电镜观察修复的情况。结果结果显示将PLGA分子器件移植于脊髓损伤区8周后,BBB评分细胞移植组都高于对照组(P<0.05);联合细胞移植组BBB评分最高(P<0.05)。光镜可观察到移植中心部有成活的神经细胞,大量轴索长人移植物,融合较好。对照组神经纤维稀疏,大量胶质细胞聚集形成瘢痕,白质、灰质界限消失,被大量胶质细胞填充或有空洞形成,形成的胶质瘢痕形状不规则。在脊髓半横断损伤后立即进行SEP检测,各组动物的诱发电位波形完全消失;移植术后8周,联合细胞移植组体感诱发电位明显恢复,较其它组潜伏期缩短,波幅增高。联合细胞移植组可观察到大量辣根过氧化物酶阳性标记物和标记的神经细胞。透射电镜可观察到对照组中以胶质瘢痕为主,较少有有髓神经纤维。在联合细胞移植组中,有大量的有髓神经纤维及无髓神经纤维。结论神经干细胞和雪旺细胞在被修饰的PLGA的轨道上,很容易贴附和定向生长。轨道以外部分细胞几乎不能够贴附和生长。这种包含了神经干细胞和雪旺细胞的被修饰的PLGA所组成的分子器件共同移植于脊髓损伤区,能够促进神经干细胞定向生长,连接脊髓损伤的断端,能够促进受损伤的脊髓修复和再生。为临床治疗脊髓损伤提供实验依据和新的治疗思路。
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