论文部分内容阅读
目的：研究人源化抗VEGF单克隆抗体BD0801单药及其联合氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)/奥沙利铂(oxaliplatin, OXA)体外对人肝细胞癌(HCC)细胞株Bel7402增殖和人微血管内皮细胞(HMEC-1)形成血管的抑制作用。方法：应用不同浓度BD0801单药或BD0801联合5-FU/OXA体外作用于Bel7402和HMEC-1细胞,以贝伐单抗(Bevacizumab, Bev)为阳性对照药,采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)测定细胞增殖抑制率；DAPI染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态；流式细胞术分析细胞凋亡率和周期分布；酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养液中血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor, VEGF)水平变化；蛋白印迹法(Western blot)检测细胞VEGF、pVEGFR蛋白表达水平变化;体外细胞划痕和Transwell共培养实验观察药物对HMEC-1细胞迁移能力的影响；通过体外管腔形成实验,观察药物对HMEC-1体外管腔形成能力的影响。结果：1、BD0801通过抑制、EGF/VEGFR通路活性而抑制Bel7402和HMEC-1细胞增殖,且能有效诱导两株细胞凋亡、阻滞细胞周期。BD0801能降低两株细胞培养液中VEGF水平,并对HMEC-1细胞迁移及管腔形成能力有一定抑制作用。2、与单药作用比较,BD0801联合5-FU/OXA可显著增强抑制Bel7402和HEMC-1细胞增殖及诱导细胞凋亡作用,使S期细胞比例上升,并增强抑制VEGF/VEGFR通路活性作用,同时可增强抑制HMEC-1迁移及管腔形成。3、与Bev单药或联合5-FU/OXA相比,BD0801单药或联合5-FU/OXA能更有效地抑制Be17402和HMEC-1细胞增殖、诱导细胞凋亡及抑制VEGF/VEGFR通路活性,并能更有效地抑制HMEC-1迁移和管腔形成能力。结论：BD0801体外通过靶向VEGF/VEGFR路径抑制HCC细胞Be17402和内皮细胞HMEC-1生长、诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期,并能抑制HMEC-1细胞迁移和管腔形成。与单药作用相比,BD0801联合细胞毒药物5-FU/OXA体外通过靶向VEGF/VEGFR路径增强抑制HCC细胞Be17402和内皮细胞HMEC-1生长、诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期,并能增强抑制HMEC-1细胞迁移和管腔形成。与Bev相比,BD0801的上述生物学效应更强。提示BD0801有可能是一个有效的抗VEGF单克隆抗体,值得进一步深入研究其治疗HCC的可能性。