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目的：通过观察冬凌草甲素对胰腺癌BxPC-3细胞增殖、形态、细胞周期及细胞凋亡的影响,研究其对Caspase信号通路中基因表达的调节作用,分析冬凌草甲素介导胰腺癌BxPC-3细胞凋亡与Caspase信号通路之间的内在联系,分析冬凌草甲素干预前后人胰腺癌细胞株BxPC-3的基因表达差异,寻找细胞增殖和凋亡的调控分子和信号通路,探讨冬凌草甲素抗肿瘤的分子机制,为冬凌草甲素抗肿瘤提供可能的途经,为临床使用提供有利数据。方法：1、无菌培养BxPC-3细胞,MTT(3,4,5-dimethylthliazol-2,5-dipenyltetrazolium bromid,MTT)法筛选冬凌草甲素抑制BxPC-3细胞增殖的最低浓度、最佳浓度及最佳作用时间。2、0μg/ml、8μg/ml和32μg/ml冬凌草甲素浓度分别作用于BxPC-3细胞,37℃,5%CO2孵育36h,经胰酶消化,离心收集细胞,预冷PBS重悬,冰乙醇固定,加入PI进行染色室温避光孵育20min,然后采用流式细胞技术检测冬凌草甲素对BxPC-3细胞周期的影响。3、0μg/m1、8μg/ml和32μg/ml冬凌草甲素浓度分别作用于BxPC-3细胞,37℃,5%CO2孵育36h,Hoechst33258荧光染色观察细胞荧光强弱。4、0μg/ml、8gg/ml和32μg/ml冬凌草甲素浓度分别作用于BxPC-3细胞,37℃,5%CO2孵育36h,经胰酶消化,离心收集细胞,重悬吹打均匀,加入Annexin V和PI进行双染,室温避光孵育20min,流式细胞技术检测细胞凋亡。5、0gg/m1、8gg/ml和32μg/ml冬凌草甲素浓度分别作用于BxPC-3细胞,37℃,5%CO2分别孵育12h、24h和36h,RIPA裂解液直接裂解细胞提取细胞总蛋白,进行蛋白变性,Western Blot法检测磷酸化H2AX蛋白(γH2AX)、p53、周期蛋白依赖性蛋白激酶CDK1(Cdc2)、Caspase蛋白家族(Caspase3、7、8、9)及聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(poly-ADP-ribose polymerase, PARP)的表达。6、0μg/ml和32μg/ml冬凌草甲素浓度分别作用于BxPC-3细胞,37℃,5%CO2孵育36h,TrizoL液裂解细胞,收集悬液,提取细胞总RNA,经安捷伦快速扩增标记试剂盒标记样品,与基因表达谱芯片于安捷伦杂交室进行杂交,安捷伦DNA微阵列扫描仪扫描芯片收集数据,经分析得出药物作用后差异表达的基因。结果：1、MTT法结果显示冬凌草甲素能抑制BxPC-3细胞增殖,并且呈剂量时间依赖性,且最低作用浓度、最佳作用浓度及最佳作用时间分别是8μg/ml、32gg/ml及36h。2、流式细胞技术检测冬凌草甲素对BxPC-3细胞周期的影响结果表明,以空白组(0μg/ml冬凌草甲素)为对照,8μg/ml冬凌草甲素组S期比例无显著性变化(P>0.05),G2/M期比例显著性增加(P<0.05)；32gg/ml冬凌草甲素组S期及G2/M期的比例均极其显著性增加(P<0.01)3、Hoechst33258荧光染色结果显示：空白对照组的荧光染色呈均匀微弱的荧光；加药组的荧光染色细胞膜与细胞核呈浓缩致密的强蓝色荧光。4、流式细胞技术联合Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡结果显示：8μg/ml冬凌草甲素组与空白对照组比较,细胞凋亡率显著增加(P<0.05),当到达32μg/ml冬凌草甲素浓度时,细胞凋亡率极其显著增加(P<0.01)5、Western Blot法检测细胞蛋白表达结果显示：以空白组(0μg/ml冬凌草甲素)为对照,8μg/ml和32μg/ml冬凌草甲素组均能显著下调CDK1蛋白表达量(P<0.05)、均能显著上调γH2AX及p53蛋白表达量(P<0.05),且Caspase3、7、8、9及PARP均具有不同程度的水解,产生了水解片段。6、应用表达谱芯片比较冬凌草甲素干预前后人胰腺癌细胞株BxPC-3的基因表达差异结果显示：32ug/ml冬凌草甲素组与空白对照组相比,显著上调基因有520种,显著下调基因有651种。结论：1、冬凌草甲素抑制BxPC-3细胞的增殖,下调相关周期蛋白CDK1的表达及上调yH2AX的表达,影响了BxPC-3细胞的周期,阻滞细胞于S期及G2/M期。2、冬凌草甲素能上调BxPC-3细胞p53蛋白的表达及激活Caspase信号通路,可能通过p53及Caspase信号通路诱导BxPC-3细胞凋亡3、冬凌草甲素对胰腺癌细胞Bxpc-3基因表达谱有一定影响,其抗肿瘤和免疫调节作用可能与一系列肿瘤及免疫相关基因的表达变化有关。