消散因子石英晶体微天平和荧光猝灭动态监测表没食子儿茶素没食子酸酯与人唾液的相互作用

来源 :福建医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:ahcyw
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目的:采用QCM-D在体外原位、实时和动态监测人全唾液(WS)、腮腺唾液(PS)和下颌下腺/舌下腺唾液(SMSLS)在HA芯片表面吸附和解离的过程。通过自组装单层膜(SAM)的WS和PS,测量EGCG对WS和PS生物膜的吸附和解离的过程。采用荧光猝灭实验,以考察EGCG猝灭WS和PS的效果,方法:收集刺激性的上述三种唾液,监测唾液蛋白吸附于HA芯片表面以及SAM的WS和PS吸附EGCG所造成的频率改变(ΔF)和消散因子变化(ΔD),及形成生物膜的质量(m)、厚度(h)、剪切弹性模量(μ)和剪切粘度(η)。根据Langmuir(L)和Freundlich(F)吸附等温线的相关系数判断EGCG在WS和PS膜表面的吸附模型,计算吸附动力学常数:L常数(K)、饱和吸附量(Mm)、F常数(Kf)、F吸附强度常数(1/n)。采用EGCG作为WS和PS的荧光猝灭剂,考察EGCG猝灭WS和PS的效果和猝灭类型,计算表观静态猝灭常数(K)、静态猝灭常数(Ks)、表观静态猝灭结合常数(KA)、静态猝灭结合常数(KLB)和结合位点数(n)。结果:SMSLS的蛋白质吸附量最大,形成的膜最厚,PS最小,WS介于两者中间。SMSLS膜的硬度最小,膜的流动性最大,剪切弹性模量和剪切粘度最小。WS膜的硬度介于PS和SMSLS之间。PS膜表面形成EGCG吸附层后,剪切弹性模量和剪切粘度变小。WS膜含水量大,吸附EGCG后部分水分被挤出,因此剪切弹性模量和剪切粘度增大。采用L和F吸附等温式均可合理表征EGCG对WS和PS膜的吸附行为。相比PS膜,WS膜对EGCG的吸附容量更大,亲和力更好。EGCG对WS和PS中的荧光基团敏感性相近。本实验的猝灭类型是静态猝灭,反应没有引起蛋白质的构象发生改变。一个唾液蛋白质分子上存一个EGCG结合位点。结论:唾液成分不同,在HA上形成生物膜的特性不同;不同唾液生物膜对EGCG吸附的容量和亲和力不同;唾液蛋白质分子与EGCG结合形成复合物使唾液蛋白质荧光猝灭。
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