论文部分内容阅读
【目的】本课题将以生长在苍山山系的大理茶树为研究对象，优化出适合该种植物内生真菌的分离条件；然后，分离出内生真菌并进行菌种鉴定；其次，提取出分离到的内生真菌的代谢产物；最后，用提取物来做抑菌实验，寻找具有抑菌作用的内生真菌。【方法】采集苍山山系同一纬度地区的三个点——大理学院茶园、感通山庄茶园、太和村茶园的茶树的老叶、嫩叶、树枝共18份样品，摸索出内生真菌的分离条件，包括表面消毒方法和培养条件，再根据该条件进行内生真菌的分离、纯化，结合形态学和ITS序列分析方法进行菌种鉴定，然后用细胞破碎法结合有机溶剂萃取法进行代谢产物的提取，最后用微板肉汤稀释法做代谢产物的抑菌试验，并检测出具有抑菌作用菌株的最小抑菌浓度MIC值。【结果】1.优化出了适合苍山山系茶园茶树内生真菌的分离条件：茶树茎的表面消毒方法为75%的乙醇的消毒2min，5.2%的次氯酸钠消毒5min，后无菌水漂洗四次，培养基用PDA培养基；茶树叶的表面消毒方法为75%的乙醇的消毒2min，5.2%的次氯酸钠消毒20sec，后无菌水漂洗四次，培养基用PDA培养基。2.18份样品分离到13株内生真菌，分别记为：GTY1、GTY2、GTL1、GTL2、GCS1、GCS2、GCL1、GCL2、GCL3、GCL4、GCL5、GCY1、GCY2。3.13株内生真菌鉴定出了12株，其余1株为未知菌。12株内生真菌中8株（GTY2、GCS1、GCS2、GCL3、GCL4、GCL5、GCY1、GCY2）为刺盘孢属柑橘刺盘孢菌（Colletotrichum gloeosporioides），2株（GTY1、GCL2）为丛梗孢目暗梗孢科孔球孢属，1株(GTL1)为丛梗孢目暗梗孢科节菱孢属，1株（GCL1）为黑盘孢目黑盘孢科盘多毛孢属。4.试验筛选出了4株具有抑菌作用的内生真菌：GCL1、GCL4、GCL5、GTY2。GCL1、GCL4对大肠杆菌的MIC值分别为32μg/ml和8μg/ml；GCL1、GCL4、GCL5对金黄色葡萄球菌的MIC值为32μg/ml、32μg/ml和2μg/ml；GTY2对绿脓杆菌的MIC值为8μg/ml。【结论】1.本实验优化出了茶树内生真菌的分离条件；2.本研究结果表明苍山山系两个茶园的茶树内生真菌的群落结构不同，且内生真菌菌种具有多样性和丰富性；3.在分离出的茶树内生真菌中，优势菌种为刺盘孢属柑橘刺盘孢菌（Colletotrichum gloeosporioides）；4.本次试验筛选出的4株具有抑菌作用的菌株：GCL1、GCL4、GCL5、GTY2；5.为研究苍山茶树内生真菌的应用提供了实验基础。