丁草胺诱导的斑马鱼胚胎/幼鱼氧化应激及BSA构象变化研究

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丁草胺是我国应用最多的除草剂之一。残留在环境中的丁草胺对生物甚至人类具有潜在毒性。因此准确全面地了解丁草胺对生物的毒性,有助于其科学使用和管理。斑马鱼因其诸多优点而成为使用广泛的模式生物,已有报导表明外源性污染物会诱导斑马鱼体内发生氧化应激,引起机体的氧化损伤,相较于对污染物毒性作用的研究,抗氧化剂的保护作用相对报道较少。本论文的目的是从斑马鱼胚胎生长发育、氧化应激水平和BSA构象变化的角度来探究丁草胺的生物毒性效应。维生素C(Vc)是一种常见水溶性抗氧化剂,常用作保健品及饲料添加剂,研究表明VC能够有效保护细胞膜和脂蛋白免受过氧化损伤。本文首次探讨了Vc与丁草胺对斑马鱼胚胎的联合作用,并首次对丁草胺-BSA相互作用进行了系统探究。具体研究内容和结论如下:(1)评价了丁草胺对斑马鱼胚胎生长发育的毒性效应:孵育96 hpf后,丁草胺对斑马鱼具有致死、致畸作用,表现为心包水肿、卵黄囊肿、身体弯曲、孵化延迟等,毒性呈剂量-效应关系;(2)评价了丁草胺及Vc对斑马鱼胚胎生长发育的联合作用:暴露72hpf后,Vc能够缓解由丁草胺引起的胚胎死亡和畸形;但当Vc单独存在时,会增加机体负担;(3)进一步探讨了丁草胺及Vc对斑马鱼胚胎/幼鱼抗氧化系统的联合作用:暴露72 hpf后,丁草胺会引起斑马鱼胚胎/幼鱼氧化应激,表现为体内ROS含量升高,导致脂质过氧化,并有剂量-效应关系;丁草胺对酶活性的影响,表现为低浓度诱导,高浓度抑制,并伴随有能量代谢速率的变化;Vc能明显降低丁草胺导致的ROS增量和过氧化程度,将胚胎体内酶活性维持在一定范围。表明Vc可以作为抗氧化物参与ROS的清除过程,缓解丁草胺引起的氧化损伤,但该过程伴随着较高的能量消耗;(4)探究了丁草胺与牛血清白蛋白BSA之间的相互作用:丁草胺会通过范德华力和氢键与BSA结合,以静态猝灭机制猝灭其内源性荧光,相互作用的过程中,BSA中色氨酸残基微环境改变,肽链紧缩,蛋白的构象发生了变化。
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