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本论文的主要内容是基于适体的特异性并利用纳米技术与DNA分子杂交技术、DNA循环复制相结合,研制出高灵敏度、高选择性的新型适体传感器,对特定生物分子(本研究以溶菌酶为模型化合物)等进行选择性地识别和测定,为许多疾病的临床早期诊断提供理论基础。本文着重采用以下两种方式进行了溶菌酶适体传感器的研制和性质研究:1.在这项研究中,建立了一种与DNA有关的复杂的多样的自主循环过程,可以显著增强溶菌酶检测的灵敏度。反应网络由适体识别溶菌酶(靶)引发,并通过3组与DNA相关的循环反应过程提供级联信号放大。整个反应网络由链替换聚合和靶替换聚合组成的上游循环提供初级信号放大,由链替换聚合促成下游循环提供进一步的信号放大,以及一系列DNA剪切-聚合循环提供额外的信号放大。在这3组循环反应中共有8个自主和相关的循环发生,而只需要2个探针,2个引物和2个酶作为初始原料投入。尽管反应网络的机制十分复杂,但操作上可以采用简单的一锅煮模式。通过这个反应网络,可以在1.0×10-14M到1.0×10-12M之间定量检测溶菌酶。根据3σ规则,确定检测限为3.6×10-15M;与没有放大效果时的检测限2.7×10-8M相比,循环反应网络使灵敏度提高7个数量级。本文中不仅实现了DNA片段的复制替换,并且实现新的大分子与核酸(适体链)的替换,并且得到充分验证,整个大体系也明显改善了检测的灵敏度,在逐级循环过程中,大大提高了传感器的灵敏度,本体系的选择性非常好,因为整个体系的设计是在适体基础上,适体的特异性选择得到了充分的验证,本传感器可以实现特定蛋白质等大分子物质的检测,并有望延伸到生物医学研究或临床诊断等领域。2.这项研究是在上一研究基础上建立的,都是建立了一种基于DNA滚环聚合有关的复杂多样的自主循环过程,可以显著增强溶菌酶检测的灵敏度。反应网络同样由识体识别溶菌酶(靶)引发,并通过3次与DNA相关的循环反应过程提供级联信号放大以提高检测溶菌酶额灵敏度。放大过程包括三步:通过滚环扩增提供基础的信号放大;通过靶替换聚合提供进一步的信号放大;通过DNA剪切-聚合循环提供额外的信号放大。操作上仍可以采用简单的一锅煮模式。通过这个反应网络,可以在1.0×10-14M到1.0×10-12M之间定量检测溶菌酶。根据3σ规则,确定检测限为1.3×10-14M。本文中不仅实现了DNA片段的复制替换,并且实现新的大分子与核酸(适体链)的替换,并且得到充分验证,整个大体系也明显改善了检测的灵敏度,在逐级循环过程中,大大提高了传感器的灵敏度,本体系的选择性非常好,因为整个体系的设计是在适体基础上,适体的特异性选择得到了充分的验证,本传感器可以实现特定蛋白质等大分子物质的检测,并有望延伸到生物医学研究或临床诊断等领域。