鹅细小病毒病是由小鹅瘟病毒引起的雏鹅或雏番鸭的一种病毒性疾病。此病具有败血性和高度接触性对一月龄雏鹅发病率和死亡率高达95%-100%。由于该病病的传染性较强、发病时间较短、死亡率较高而给我国养鹅业带来了巨大的经济损失。目前对该病诊断主要借助临床症状的观察及病理剖检变化观察等手段做出判断,但仅为初步诊断,难以做出准确的诊断。想要做出较准确的诊断,常借助实验室诊断方法。主要有琼脂扩散试验、病毒中和性试验等检测方法,但上述方法都相应的缺乏敏感性或特异性,也不适合大批量检测等缺点。对该病治疗除对雏鹅注射抗血清或卵黄抗体外尚无其它有效的办法。由于本病在诊断、预防和治疗三方面都存在弊端,因此临床上急需要一种对该病治疗效果好的生物制剂和一种简便、快速、敏感、特异同时能大批量检测的诊断方法。本试验利用浓缩的GPV免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术,经间接ELISA方法筛选和有限稀释法克隆后获得一株抗GPV的杂交瘤细胞系(484)。经鉴定,其MAb的亚型为IgG1型,轻链为K型。ELISA和western blotting试验结果表明,获得的4B4 MAb可特异性的识别GPV,并可特异性识别GPV VP3蛋白,表明4B4 MAb识别的表位可能位于GPV VP3蛋白的保守区域。为建立鹅细小病毒(GPV)检测方法,本研究以兔抗GPV IgG为捕获抗体,抗GPV单克隆抗体为检测抗体。通过方阵试验确定了兔抗GPV IgG最适包被浓度为16μg/mL,抗GPV单克隆抗体最佳工作浓度为10.8μg/mL,酶标二抗最佳稀释倍数为1：4000。成功建立了检测GPV单抗双夹心ELISA方法,该方法对GPV检测灵敏度达0.312μg/mL。用该法对延边某养鹅场疑似小鹅瘟病的252只雏鹅进行检测,结果阳性率为75.79%,与龚建森建立的双抗夹心ELISA方法的检测结果符合率达91.11%。本研究制备了抗鹅细小病毒单克隆抗体,并建立了单抗双夹心ELISA方法。为临床研制GPV诊断试剂、治疗试剂的奠定了基础,同时为GPV的检测和区域流行病学调查提供了一种简便快速的诊断方法。