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第一部分噬菌体展示HIV-1 Tat38-61（51N/55N）碱性区突变体库的构建目的用噬菌体展示的方法构建Tat38-61（51N/55N）碱性区突变体文库,进一步研究HIV-1 Tat38-61表位的分子进化筛选。方法采用含随机核苷酸序列的引物,通过Overlap PCR的方法获得51和55位氨基酸随机突变的全长Tat编码序列,再以此为模板PCR扩增出两端含有Xba I识别序列的Tat38-61突变体片段HIV-1 Tat38-61（51N/55N）,克隆至噬菌体展示载体pCANTAB5S上,转化大肠杆菌TG1,经M13K07辅助噬菌体拯救,构建噬菌体展示Tat38-61（51N/55N）碱性区突变体文库。结果成功构建噬菌体展示Tat38-61（51N/55N）碱性区突变体文库,结果显示文库的库容量为5.0×106,滴度为2.65×1012 TU/ml,阳性克隆率为56.50%;序列分析显示文库中51、55位核苷酸与氨基酸均呈随机性分布。结论所建文库达到进行分子进化筛选的要求,为获得可用作疫苗候选物的新型Tat突变体奠定基础。第二部分HIV-1 Tat38-61（51N/55N）碱性区突变体文库的亲和筛选目的通过不同HIV-1 Tat免疫血清及抗体对HIV-1 Tat38-61（51N/55N）碱性区突变体库进行亲和筛选,以期获得抗原性保留、生物学活性降低新型免疫原的代表性序列。方法用兔抗PET32-Tat38-61抗体、兔抗PET32-Tat38-101抗体及兔抗PET32 - Tat（38-101）血清同时对HIV-1 Tat38-61（51N/55N）碱性区突变体库进行5轮筛选,每种筛选分别随机挑取10个第3、4和5轮的阳性克隆进行序列分析。结果筛选过程中,空载体5S比例及反向插入序列比例呈现出逐渐减少并稳定的趋势,显示了筛选的有效性。阳性筛选克隆的序列分析显示,筛选获得了多个在2种抗体和1种血清筛选后文库中均出现的共同序列及在各自筛选文库中出现的重复序列,阳性序列出现了一些特征性的51位和55位氨基酸的关联51P-55L（4次重复）和51Q-51L（3次重复）。结论我们通过有效的筛选,筛选出一些特征性的代表性氨基酸序列,为后续研究Tat分子中碱性区重要抗原的特性及基于该抗原的Tat治疗性疫苗的研发提供了一新的可行途径。第三部分HIV-1 Tat38-61（51N/55N）突变体蛋白的构建表达目的构建HIV-1 Tat38-61（51N/55N）突变体融合蛋白,检测其免疫原性,并比较突变体蛋白和天然HIV-1 Tat38-61蛋白及HIV-1 TatE蛋白生物活性的差异。方法我们挑选出三个经过亲和筛选出来的代表性序列, Tat38-61-F3-16（51L/55T）、Tat38-101-F4-16（51H/55R）、Tat38-101血清-F3-11（51S/55P）,根据大肠杆菌偏好密码子优化后的HIV-1型株Tat DNA序列设计引物,我们首先对全长Tat1-101的51和55位氨基酸进行定点突变,再以此为模板PCR扩增Tat38-61编码序列,结果顺利地获得了51和55位氨基酸定点突变的Tat38-61编码序列,T/A克隆法将其克隆到pMD18-T载体进行测序。将测序正确的Tat38-61克隆至原核表达载体pET32a,构建其原核表达质粒pET32a-Tat38-61。将表达质粒转入E.coli BL21（DE3）中,经IPTG诱导表达,并用Ni-NTA亲和层析法纯化目的蛋白。结果PCR方法扩增出72bp的Tat38-61基因片段;限制性酶切分析及序列测定表明重组表达质粒pET32a-Tat38-61的构建完全正确,SDS-PAGE显示在大肠杆菌中表达出相对分子质量为21300D（道尔顿）的PET32a-Tat38-61突变体融合蛋白。并通过ELISA实验与天然HIV-1 Tat38-61蛋白及HIV-1 TatE成功竞争抑制。结论Tat38-61表位是Tat的主要表位,在对抗天然Tat中38-61抗体的抑制最好的分别是天然Tat-pET32a、Tat38-61-pET32a。三种突变体蛋白对天然Tat中38-61抗体均有抑制作用,但抑制作用均弱于天然Tat-pET32a、Tat38-61-pET32a。