随着人工育苗与养殖技术的发展,石斑鱼已成为我国重要的海水养殖品种。然而,随着养殖规模不断扩大,石斑鱼病害问题也日益严重,其已经成为限制石斑鱼养殖业发展的主要因素之一。为了保证石斑鱼养殖业健康稳定的发展,积极开展产业病害现状调查和对疾病病原病理学的研究成为了疾病综合防治中必不可少的基础性工作。本论文的主要研究内容如下:1、海南地区养殖石斑鱼主要细菌病调查分析2016年11～12月,对海南主要石斑鱼养殖区中的三种主要养殖石斑鱼珍珠龙胆石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus ♀ × Epinephelus lanceolatus ♂、棕点石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus)和鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus)的细菌病发病情况进行了调查,调查内容包括养殖石斑鱼流行病症状、养殖环境、养殖模式和危害状况等。结果发现,细菌性疾病是海南养殖石斑鱼中危害最为严重的病害之一,其中,细菌性皮肤溃疡病和肠炎病发病面积广、死亡率高,对养殖石斑鱼危害严重。2、海南地区养殖石斑鱼皮肤溃疡病病原病理学研究养殖石斑鱼皮肤溃疡病在海南全岛11个采样点中的9个采样点有发现,发病严重养殖场累积死亡率高达95%。其主要患病症状为:患病初期摄食能力下降,游泳活力差,体表或鳍部局部充血,并出现点状溃疡;患病后期病鱼基本不摄食,反应迟钝,侧身游泳,体表出现大面积溃疡,甚至出现烂鳍、烂尾等症状,眼膜发白,眼睛红肿或烂眼,鳃丝溃烂、发白;有些个体有体表发黑和腹胀等现象,最后沉底死亡。解剖病鱼发现:患病前期肝脏和脾脏充血、肿大;患病后期肝脏发白、脾脏黑褐,肠道充血发红,伴有腹水现象。从9个采样点患皮肤溃疡病石斑鱼样品中分离得到9株优势菌株,人工回感试验表明其感染特征与自然病症一致,根据科赫法则证明这9株细菌均为皮肤溃疡病的致病原。经生理生化和16S rDNA序列分析,这9株细菌均鉴定为哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)。其中,菌株SSY-1对珍珠龙胆石斑鱼的毒力最强,其14天半致死浓度LD50值为7.18×104CFU/g鱼体重。药敏实验结果表明,这9株病原菌对34种抗菌药物的药敏谱基本一致,均对氟苯尼考、强力霉素、四环素等药物高度敏感。组织病理学和超微病理学研究表明,患病鱼的鳃丝、皮肤、肌肉、肝脏、脾脏、肾脏、肠道和脑等组织器官都发生了不同程度的病理变化,属于全身性感染。3、海南地区养殖石斑鱼肠炎病病原病理学研究养殖石斑鱼肠炎病在海南全岛11个采样点中的7个采样点有发现,发病严重养殖场累积死亡率达40%。其主要患病症状为:患病前期停止摄食或者摄食后吐出,游泳无力;患病后期腹部扁平下陷,体色发黑,身体严重消瘦,最后沉底死亡;解剖发现病鱼内脏团明显萎缩,肠道内无食物,胃壁和肠壁变薄且透明,肠道内充满大量粘性白色物质,有白便现象。从7个采样点患肠炎病石斑鱼样品中分离得到7株优势菌株,人工回感试验表明其感染特征与自然患病一致,根据科赫法则证明这7株菌株均为肠炎病的病原菌。经生理生化和16S rDNA序列分析,这7株细菌均鉴定为欧文氏弧菌(Vibrioowensii)。其中,菌株EDF-1对珍珠龙胆石斑鱼的毒力最强,其14天半致死浓度LD50值为2.63×105CFU/g鱼体重。药敏实验结果表明,这7株病原菌对34种抗菌药物的药敏谱基本一致,均对菌必治、头孢他啶、氟苯尼考、阿米卡星等药物高度敏感。组织病理学和超微病理学研究表明,患病鱼的肠道、肝脏、脾脏、肾脏和鳃丝等组织器官都发生了不同程度的病理变化。4、病原菌哈维氏弧菌毒力基因PCR检测分析使用 17 个常见的毒力基因(luxR、toxRvh、chiA、vhpA、vhml、serine protease、vhs、vhh、toxRvc、hlyA、tcpA、zot、ctxA、tdh、trh、flaC、wh)引物对从上述患病石斑鱼中分离的22株哈维氏弧菌进行了毒力因子PCR检测,结果显示,22株哈维氏弧菌主要携带luxR、serine protease、chiA、vhh和vvh等5种毒力基因,检测率分别为100%、100%、100%、95.5%和59.1%,表明该5个毒力基因可能是该地区哈维氏弧菌的主要毒力因子。本论文主要调查了海南岛沿岸养殖石斑鱼细菌病发病状况,确定了两种主要细菌性疾病皮肤溃疡病和肠炎病的致病原并测定了其药敏谱,分析了两种疾病的组织病理变化特征,对主要病原菌哈维氏弧菌进行了毒力基因检测分析,为石斑鱼的健康养殖和细菌性疾病防控提供了科学依据和理论参考。