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目的:通过对非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠肝细胞、Kupffer细胞SREBP-1c信号通路相关基因和蛋白表达水平的研究,从细胞分子水平探讨NAFLD发病机制及疏肝健脾方药的干预作用机制。方法:75只雄性SD大鼠适应性饲养1w,根据体重采用随机数字表法随机分为5组,每组15只(其中9只用于常规指标检测,6只用于提取肝细胞、Kupffer细胞)。分别是:正常组、模型组、疏肝组、健脾组、合方组。正常组给予维持期饲料喂养,其余各组给予高脂饲料喂养,同时各用药组大鼠按10mL/kg·BW灌服相应方药,正常组和模型组灌服实验动物饮用水,连续8w。具体是:疏肝组(灌服柴胡疏肝散9.6g·kg-1);健脾组(灌服参苓白术散30g·kg-1);合方组(灌服柴胡疏肝散和参苓白术散合方39.6g·kg-1)。8w后,各组大鼠取9只,3%戊巴比妥钠腹腔麻醉,腹主动脉采血,肝组织匀浆取上清,全自动生化分析仪检测各组大鼠血清AST、ALT、TG、TC、HDL-C、LDL-C及肝组织上清TG、TC含量;HE及油红O染色观察肝组织病理。各组剩余6只大鼠采用离体循环灌注Ⅳ型胶原酶、差速离心、密度梯度离心法分离肝细胞、Kupffer细胞,Q-PCR及Western blot检测肝细胞、Kupffer细胞SREBP-1c、SCD-1mRNA及蛋白表达水平。结果:1肝组织病理观察HE染色正常组大鼠肝小叶轮廓清晰,中央静脉位于肝小叶正中,肝窦结构正常,肝索以中央静脉为轴心呈放射状排列。肝细胞呈多边行,细胞核位于细胞中央,核大而圆,染色明显,细胞质丰富呈红染,无空泡。模型组大鼠肝小叶轮廓欠清晰,中央静脉可见,肝窦结构难以辨认,肝索结构紊乱,排列不齐,肝细胞肿胀,细胞核位于细胞边缘,细胞浆内可见大小不等的小空泡,有的肝细胞小空泡融合成大泡。各用药组大鼠肝组织结构介于正常组与模型组之间,其中以疏肝组大鼠肝组织结构与正常组最为相似,提示疏肝组方药改善NAFLD大鼠肝组织病理疗效较好。油红O染色正常组大鼠肝细胞核呈淡蓝染色,少许肝细胞胞浆内可见散在的红染脂滴。模型组大鼠肝细胞肿胀,细胞核呈深蓝染色,细胞浆可见大量红色脂滴,少许肝细胞脂滴融合成大脂滴。各用药组大鼠肝细胞脂滴含量介于正常组与模型组之间,其中以疏肝组大鼠肝细胞脂滴含量与正常组最为接近,提示疏肝组方药减少NAFLD大鼠脂肪沉积疗效较好。2ALT、AST含量测定实验结果显示,与正常组比较,模型组大鼠血清ALT、AST均有所升高,但无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,各用药组大鼠血清ALT、AST均有所降低,但无统计学意义(P>0.05)。各用药组组间比较无统计学意义(P>0.05)。提示NAFLD大鼠不一定存在血清ALT、AST升高,这也从另一个侧面反映出虽然NAFLD大鼠存在严重的脂质代谢紊乱,肝细胞内大量脂肪蓄积,但是肝细胞仍未达到严重坏死的受损程度。3血脂及肝脂含量测定血脂实验结果显示,与正常组比较,模型组大鼠血清TC、TG、LDL-C含量显著升高(P<0.01),HDL-C含量显著降低(P<0.01);与模型组比较,各用药组大鼠血清TC、LDL-C含量显著降低(P<0.05,P<0.01),疏肝组大鼠血清TG含量显著降低(P<0.01),HDL-C含量显著升高(P<0.01);各用药组组间比较,疏肝组大鼠血清HDL-C含量明显高于健脾组及合方组(P<0.01),LDL-C含量明显低于健脾组及合方组(P<0.05,P<0.01)。提示NAFLD大鼠存在严重的脂质代谢紊乱,疏肝健脾方药可不同程度降低NAFLD大鼠的血脂,以疏肝组作用最为显著。肝脂实验结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肝组织TC、TG含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,疏肝组大鼠肝脂质肝组织TC、TG含量显著降低(P<0.05)。各用药组组间比较无统计学意义(P>0.05)。提示NAFLD大鼠肝脂含量显著升高,疏肝健脾方药可不同程度降低NAFLD大鼠肝脂含量,以疏肝组作用最为显著。4肝细胞、Kupffer细胞SREBP-1c信号通路相关基因及蛋白表达水平实验结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肝细胞、Kupffer细胞SREBP-1c、SCD-1mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各用药组大鼠肝细胞、Kupffer细胞SREBP-1c、SCD-1mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01)。各用药组组间比较,疏肝组大鼠肝细胞SREBP-1c、SCD-1mRNA表达水平明显低于健脾组(P<0.05),Kuppfer细胞SREBP-1c mRNA表达水平明显低于合方组(P<0.05),SCD-1mRNA表达水平明显低于健脾组(P<0.05)。提示NAFLD大鼠肝细胞、Kupffer细胞SREBP-1c信号通路的激活可能是NAFLD的发病机制之一,SREBP-1c、SCD-1mRNA及蛋白可能是疏肝健脾方药抗NAFLD的有效作用作用靶点。结论:1.采用高脂饲料喂养SD大鼠8w可成功复制NAFLD模型,该模型与人类常见NAFLD类型发病机制、肝组织病理学改变、血脂、肝脂及血清酶学变化较为相似,是研究人类NAFLD发病机制较为合适的动物模型。2.高脂饮食是人类常见NAFLD类型的主要病因,肝郁脾虚且以肝郁偏重可能是NAFLD的基本病机之一。3.疏肝健脾方药可能是通过调节脂质代谢紊乱,减少肝脏脂质沉积,发挥抗NAFLD作用。4.肝细胞、Kupffer细胞SREBP-1c信号通路激活,上调TC、TG合成,过多的脂质沉积于肝脏可能是NAFLD的发病机制之一。SREBP-1c、SCD-1mRNA及蛋白可能是潜在的抗NAFLD有效作用靶点。5.疏肝健脾方药可能是通过抑制肝细胞、Kupffer细胞SREBP-1c信号通路激活,下调TC、TG合成,减少肝脏脂质沉积,发挥抗NAFLD作用。SREBP-1c、SCD-1mRNA及蛋白可能是疏肝健脾方药抗NAFLD的有效作用靶点。